Достоверность иха на вич

Как диагностировать ВИЧ

Как диагностируют ВИЧ-инфекцию?

Для скрининга на ВИЧ применяется метод ИФА (ELISA). Скрининг — это предполагаемое выявление нераспознанной болезни или каких-либо нарушений с помощью тестов, обследований или других процедур, которые могут быть быстро проведены. Для подтверждения диагноза ВИЧ-инфекции в РФ применяется иммуноблот.

Что такое ПЦР? Какие разновидности ПЦР бывают?

ПЦР — молекулярный метод, позволяющий выявлять генетический материал, в т.ч. и вирусов. Для выявления ВИЧ в некоторых ситуациях и по назначению врача применяется качественный (т.е. «есть» или «нет», без ответа на вопрос «сколько?») ПЦР РНК или ДНК ВИЧ, данный метод является обычно вспомогательным в диагностике и его не следует использовать для скрининга ВИЧ-инфекции.

У лиц с уже диагностированной ВИЧ-инфекцией применяется количественный метод ПЦР на РНК ВИЧ, он позволяет ответить на вопрос сколько вируса в крови. Его так же не следует применять для диагностики. ПЦР РНК выявляет циркулирующие в крови или другой биологической жидкости вирусы, а ПЦР ДНК позволяет находить вирус, интегрированный в клетки.

Можно ли в особых случаях, когда сильно хочется и нет никаких сил ждать, применять ПЦР РНК или ДНК ВИЧ для скрининга на ВИЧ?

Да, можно. Нет, не рекомендуется. Хотя за последнее десятилетие метод стал значительно дешевле и точнее, но все же он до сих пор и дорог, более длительный, и технически сложен, что предполагает большие риски ошибок. В России, так же впрочем, как и США, количественный метод ПЦР не рекомендован для скрининга и диагностики ВИЧ-инфекции в обычных случаях.

Чем отличается ПЦР ДНК от ПЦР РНК ВИЧ?

РНК обычно используется в количественных тестах для оценки вирусной нагрузки у диагностированных лиц, например, для оценки эффективности терапии. ДНК — в мононуклеарных клетках, например, для диагностики у детей, там, где антитела к ВИЧ матерей мешает использовать метод ИФА. И тот и другой тест могут быть и количественными, и качественными. И тот, и другой можно в особых случаях применить диагностики, но с учетом конкретных ограничений, которые накладывают технические параметры системы, т.е. по назначению врача.

Я сдавал в коммерческой лаборатории анализ ПЦР РНК (или ДНК) ВИЧ, могу ли я исключить инфицирование?

Да, скорее всего можете, но Вы делали это зря. Выше мы писали, что метод ПЦР не применяется для скрининга, а значит нужно делать ИФА.

Так какой тест мне нужно сделать, чтобы исключить у себя ВИЧ?

Тест для скрининга должен быть ИФА.

Чем отличается разные поколения ИФА? Что такое тесты 4 поколения?

Тесты 4 поколения детектируют ВИЧ-инфекцию раньше, так как «видят» не только антитела (белки иммунной системы человека, которые вырабатываются в ответ на инфекцию), как тесты 3 и более ранних поколений, но и антиген ВИЧ. Антитела вырабатываются организмом в ответ на ВИЧ-инфекцию, и на выработку нужно некоторое время. Антиген же — часть вируса. Антиген ВИЧ p24, который обычно и определяют тест-системы, это белок вирусного капсида (core компонент), суть — непосредственно кусочек вируса, понятно, что он начинает определяться в крови ранее, чем антитела. Т.е. «период окна» для теста 4 поколения совсем небольшой. Когда же начинают обнаруживаться в большом количестве и антитела против ВИЧ, спустя некоторое время, то антиген p24 часто уже не выявляется, т.к. образуется комплекс между антигеном и антителами в крови, белок становится связанным с другим белком.

Время возникновения надежной положительной реакции для ИФА тест-систем первого (1), второго (2), третьего (3) и четвертого (4) поколений, методов ПЦР-диагностики (N). АГ — антиген ВИЧ p24, АТ — антитела к ВИЧ, E -эклипс-фаза, ранняя стадия внутриклеточной репликации вируса.

По Cornett JK, Kirn TJ, Clin Infect Dis. 2013 May 10. Адаптация: arvt.ru.

Подробнее смотрите новостную статью Современные методы диагностики ВИЧ.

Что такое антитела?

Антитела — это белки иммуноглобулины, которые связываются с бактериями и вирусами и нейтрализуют их. Каждое антитело специфично, т.е. оно связывает и нейтрализует только один вид бактерий или вирусов и не действует на другие. Антитела у человека вырабатываются клетками крови — В-лейкоцитами. Еще раз — антитело — это белок (иммуноглобулин), который циркулирует в плазме крови и связывается с антигеном, вызвавшим его образование.

Что такое антигены?

Антиген — любое вещество (чаще белок, но может быть и углевод), вызывающее выработку антител лимфоцитами. Белки и другие вещества на поверхности любых «не своих» клеток рассматриваются как антигены и вызывают сходный специфический ответ, т.е. продукцию антител. В случае с ВИЧ антигенами являются белки вируса.

Какого поколения был мой тест?

Для Российской Федерации — обычно четвертого, иных у нас не ввозится и не используется, но лишь в системе службы крови, а вот в некоторых СЦ все еще могут применяться системы 3 поколения. В названии теста 4 поколения обычно присутствует что-либо из слов: «Combo», «At/Ag», «АТ/АГ», «антиген-антитело» или «p24». В любом случае, чтобы не гадать — узнайте точно заранее, или после, эта информация не является тайной.

В чем разница между ИФА и ИХЛА? Что наиболее информативнее?

Иммуноферментный анализ (ИФА) и иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА) это по сути два способа забить гвоздь, большим красным, или средним зеленым молотком. Результат один и тот же — АТ-АГ взаимодействие или отсутствие такового. Т.е. информация — забитый гвоздь — в итоге одна и та же. Обычно указания на ИХЛА в отношении диагностики ВИЧ носит характер артефакта, и на самом деле речь идет об ИФА. Т.е. с одной стороны — разницы нет, с другой — правильнее оперировать не названием метода, а названием тест-системы.

Какой период «окна» для тестов 4 поколения (At/Ag)?

Тест-системы 4 поколения способны обнаружить не только антитела к ВИЧ, которые организм вырабатывает в ответ на инфекцию, но и непосредственно ВИЧ, посредством выявления вирусного белка p24. Белок p24 может быть определен очень рано, но его уровень в крови, доступный для детекции, в период после инфицирования постепенно снижается, но одновременно с этим снижением нарастает уровень антител. Собственно, образующиеся в большом количестве антитела и связывают p24. Все люди разные, потому назвать точный 100% минимальный срок, когда сомневаться в тесте уже нет поводов — невозможно. В отдельных случаях ИФА 4 поклонения выявит ВИЧ-инфекцию уже буквально через 10 дней. Однако, на сегодня есть достаточное количество данных, которые дают нам весьма определенные ориентиры, приведем лишь несколько из них:

• Cohen MS, Gay CL, Busch MP, Hecht FM. «The detection of acute HIV infection» J Infect Dis. 2010 Oct 15;202 Suppl 2:S270-7. — 17 дней*;
• Rosenberg NE, Pilcher CD, Busch MP, Cohen MS. «How can we better identify early HIV infections?» 5-10 дней после возможности детекции методом ПЦР (7-10 дней) *;
• 20-25 дней для систем 3 поколения, и на 4 дня менее для систем 4 поколения (медианное значение, диапазон 2-14 дней)Yerly S, Hirschel B. «Diagnosing acute HIV infection» Expert Rev Anti Infect Ther. 2012 Jan;10(1):31-41.*

Итак, у нас достаточно данных считать, что лабораторные ИФА-системы 4 поколения с очень высокой вероятностью «не пропустят» ВИЧ-инфекцию уже через месяц поле инфицирования.

Специалисты одной лаборатории ссылаются на другие сроки, гораздо большие, и называют даже источник:- «Клиническая оценка результатов лабораторных исследований», М, 2000г. Как же так?

ОК, давайте заглянем в эту книгу.

Глава 8.

Антитела к ВИЧ в сыворотке

Антитела к ВИЧ в сыворотке крови в норме отсутствуют. Определение антител к вирусу иммунодефицита человека является основным методом лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. В основе метода лежит иммуноферментный анализ. Антитела к ВИЧ появляются у 90-95 % инфицированных в течение 3 мес после заражения, у 5-9% — через 6 мес и 0,5-1% — в более поздние сроки [Кожемякин Л.А. и др., 1990]. В стадии СПИДа количество антител может снижаться вплоть до полного исчезновения. При получении положительного ответа — выявлении антител к ВИЧ — во избежании ложноположительных результатов анализ должен быть повторен еще один или два раза, желательно с использованием диагностикума другой серии. Положительным считается результат в том случае, если из двух — оба или из трех — два анализа отчетливо выявили антитела.

В книге 2000 года ссылаются на данные аж 1990 — Кожемякин Л.А. и др., 1990. Даже страшно представить, из какого года они перекочевали в эту работу Кожемякина Л.А. и др., получается, что этак из года 1985, ведь тесты второго поколения у нас появились уже в 1991 году, и тогда говорить про 6 месяцев было уже не вполне неприлично, впрочем, если копнуть глубже, то и в отношении теста второго поколения это было бы спорное утверждение было, вряд ли получится копнуть так далеко в глубины десятилетий, чтобы найти источник этих цифр в книжке 1990 года, но простая логика подсказывает, что это взято из некой статьи, опубликованной до 1987 года, там, где писали про тесты первого поколения, впрочем, тогда еще никто не знал, что у тестов будут какие-то там поколения.

Тесты антиген-антитело? Нет, про них в книге 2000 года еще не слышали… А ведь такие тесты в мире появились в 1997 году, и в книге 2000 года, если ее не больше 3 лет писали, о них нельзя было не сказать. Думаю, понятно…

Что такое специфичность и чувствительность?

Специфичность диагностического теста — это доля верно определенных тестом заведомо отрицательных образцов.

Иначе говоря, для определения специфичности теста необходимо взять несколько тысяч заведомо здоровых людей и проверить их при помощи теста. Если на каждые 1000 образцов будет получено 10 ложных положительных результатов — то специфичность теста составит: (1000-10)/1000*100%=99%. Если количество ложных срабатываний больше, то специфичность становится меньше (т.е. хуже). Так, специфичность теста 99% означает примерно 10 ложных позитивных результатов на 1000 проверенных здоровых людей.

Внимательно изучите инструкцию и материалы предлагаемых на рынке тестов, найдите информацию о том, каким образом была проверена специфичность. Как правило, это данные по испытаниям нескольких тысяч образцов, полученных из разных географических регионов.

Чувствительность диагностического теста — это доля верно определенных тестом заведомо положительных образцов.

Иными словами, если мы возьмем 100 достоверно ВИЧ-инфицированных людей, проверим их тестом и получим 100 положительных результатов, то чувствительность теста будет равна 100%. Практически у всех тестов на рынке чувствительность 100%.

Нельзя путать понятия точности выявления положительных и отрицательных образцов. Точность выявления положительных образцов — это чувствительность теста, а точность выявления отрицательных образцов — это специфичность.

Чувствительный тест часто дает положительный результат при наличии заболевания (обнаруживает его). Однако, особенно информативен он, когда дает отрицательный результат, т.к. редко пропускает пациентов с заболеванием. Пример: ИФА.

Специфичный тест редко дает положительный результат при отсутствии заболевания. Особенно информативен при положительном результате, подтверждая (предположенный) диагноз. Пример: иммуноблот.

Логично использовать для скрининга (быстрого и дешевого тестирования большого числа пациентов) максимально чувствительный вид тестов, а вот для установления диагноза — максимально специфичные методы. Именно поэтому ИФА исторически является скрининговым, а иммуноблотом подтверждается ВИЧ-инфекция.

Важно понимать, что ложные положительные результаты существуют у всех тестов, никакой тест не может давать 100% специфичности! Результаты экспресс-тестов подлежат особой проверке и перепроверке в лабораторных условиях при помощи других методов. Результаты лабораторных ИФА тестов подлежат перепроверке методом иммуноблоттинга.

Может быть так, что антиген уже связан антителами, а антител еще мало для теста?

Этот феномен описан, и называется «второе окно», но это весьма короткоживущий феномен, по сути это точка пересечения двух условных кривых. Длительность «второго окна», вероятно, чаще составляет считанные часы, реже — несколько дней, весьма вероятно, что в большинстве случаев его нельзя будет зафиксировать даже специально, делая тесты каждый день.

CDC в руководстве «Laboratory Testing for the Diagnosis of HIV Infection», описывая феномен второго окна, ссылается лишь на два случая, в обоих случаях феномен наблюдался или лишь для одной тест-системы, а другая давала положительный результат, или же укладывался в следующую временную схему: три тестирования, первое — позитивно, спустя 5 дней — негативно, при перепроверки спустя 8 дней — позитивно.

Следует предполагать, что как максимум этот феномен может длиться (предположение, для утверждения недостаточно данных) около суток. И в любом случае этот феномен, если и возникает, то находится там, где мы вообще из осторожности не говорим о полной достоверности тестирования, т.е. внутри первых 4-6 недель, и с очень высокой долей вероятности этот период внутри еще более короткого промежутка — в пределах первых двух-трех недель, т.е. мы как бы укладываем оба окна одно в другое. Плюс, по всей видимости, есть некоторые условия, которые хоть сколько-то значимыми делают вероятность «подловить» это самое второе окно — исходные иммунодефицитные состояния, например, связанные с возрастом.

Реальных практических рисков при скрининге на ВИЧ феномен «второго окна» не несет — любой врач будет рекомендовать и принимать во внимание результаты тестирование на сроках, когда антитела будут в достаточных для детекции количествах.

Как узнать по ИФА, что именно было обнаружено — антитело или антиген?

Если бы доминирующие на рынке ИФА системы отдельно показывали срабатывание At или Ag линии, то мы бы знали (т.е. мы и так это знаем в общих чертах, но вот имели бы статистику по этому поводу), что за редким исключением выявление ВИЧ происходит по антителам к ВИЧ, т.е. по AT-линии.

Покажет ли ИФА дату инфицирования?

Если бы мы неким волшебным образом всегда знали точную дату инфицирования человека, то мы бы увидели, что за редким исключением, когда мы выявляем ВИЧ, то в практике это происходит довольно поздно — спустя многие месяцы и годы. В отдельных группах риска под влияем активных действий ситуация может чуть смещаться в сторону более раннего выявления, но это все не меняет погоды по большому счету. Т.е. следует понимать, что когда вы бежите после единичного контакта с человеком с неизвестным статусом тестироваться, хотя вы поступаете правильно (почти правильно — правильнее было бы не иметь контакта, не зная статуса партнера), но шансы на то, что вы инфицированы — мизерные, так говорит статистика.

Так все же, с какого срока ИФА 4 поколения совершенно надежно исключает ВИЧ?!!!111

Тест 4 поколения может в отдельных случаях выявлять ВИЧ-инфекцию уже через неделю после инфицирования, но ориентироваться на это все же нельзя, потому как это скорее исключение из правила. Как Вы видели выше — месяц вполне надежный срок для современных лабораторных тест-систем. Однако, специалисты в области здравоохранения немного перестраховываются, и надежные сроки установлены иные, в разных странах это 6, 8 или 12 недель от риска.

Если Вы считаете, что у Вас был рискованный контакт, то сделайте ИФА после 6 неделе после опасного контакта — достоверность отрицательного результата будет предельно близка к 100%. Большинство экспертов в мире считают срок в 6 недель для ИФА 4 поколения в условиях лаборатории совершенно достаточным для исключения ВИЧ-инфекции.

Источник