Если пцр на вич отрицательный а иммуноблот положительный

Тест на ВИЧ. Страшно идти за приговором?

  1. Главная
  2. Вопросы и Ответы

Тест на ВИЧ. Страшно идти за приговором?

По внешнему виду человека определить инфицирован ли он ВИЧ или нет невозможно. Недостаточно и общего анализа крови из пальца. Для этого проводят специальные лабораторные исследования — тестирование на ВИЧ. Тест проводится с сывороткой крови, взятой из вены. Основан он на выявлении в крови не самого вируса, а специальных белков — антител к ВИЧ.

Антитела — своеобразные солдаты иммунной системы, защищающие организм от инфекций. При попадании в кровь вирусов и бактерий иммунная система начинает производить антитела к ним. В ответ на проникновение в организм ВИЧ пока еще здоровая иммунная система также начинает вырабатывать антитела к ВИЧ. В достаточном для обнаружения количестве они вырабатываются обычно в течение 3 месяцев после заражения. Время появления антител зависит от состояния иммунной системы человека — у кого-то они появляются уже через 2–3 недели заражения, а в некоторых случаях, в том числе при тяжелой наркомании, этот процесс может продлиться до года. Этот период, когда вирус в организме уже есть, но антитела еще не обнаружены, называется периодом развития антител, периодом сероконверсии или периодом «серонегативного окна». В период «окна» тест на ВИЧ будет отрицательным, но инфицированный человек уже способен заражать других людей.

Для проведения анализа используются тест системы различных отечественных и зарубежных производителей, причем не существует тест-систем, имеющих абсолютную чувствительность и специфичность — каждая имеет свои ограничения. В настоящее время в нашей стране, как и во всем мире, массовые исследования на антитела к ВИЧ проводится высокочувствительным методом иммуноферментного анализа (ИФА). ИФА может дать два результата — отрицательный и положительный. Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии заражения (кроме тех случаев, когда тест проведен в период «окна»). Положительный результат указывает на вероятность заражения ВИЧ-инфекцией, но иногда этот результат может быть при наличии у человека опухолей, аллергических заболеваний, во время беременности, при аутоиммунных заболеваниях, серьезных биохимических сдвигах в организме, ряде хронических заболеваний. В таких случаях требуются дополнительные исследования в экспертной лаборатории.

Как проходит исследование методом ИФА? Сыворотка крови пациента вносится в лунку планшета, к стенкам которой прикреплены белки или фрагмента белков ВИЧ. Эти белки прочно взаимодействуют с антителами к ВИЧ, если таковые имеются в исследуемой сыворотке. Далее, к каждой молекуле антител к ВИЧ, «выловленной» из сыворотки пациента, прикрепляется фермент, который делает эти антитела видимыми, изменяя окраску раствора в лунке: чем больше в сыворотке антител, тем темнее окраска в лунке планшета. Что следует делать, если одна из лунок планшета окрасилась в темный цвет — сразу считать «приговор» окончательным? Совсем нет — с этого момента начинается процесс подтверждения положительного результата. На первом этапе исследование данной сыворотки повторяют в той же тест-системе в двух лунках — это позволяет исключить технические погрешности. Если результат подтвердился — сыворотка поступает в особое подразделение лаборатории — на окончательную экспертизу. Здесь проходит второй этап — отсекаются ошибки, зависящие от качества тест-системы (степени очистки и свойств белков ВИЧ, пластиковых планшет, окрашивающих растворов, входящих в состав тест-системы). Для этого исследование проводится в двух других тест-системах ИФА, имеющих в своем составе белки самой высокой степени очистки, «отсеивающие» большинство ложноположительных результатов. Если хотя бы в одной из этих тест-систем получен положительный результат — начинается третья стадия — в действие вступает «тяжелая артиллерия» в форме высокоспецифичного метода иммуноблотинга.

С каждым этапом анализа стоимость исследования возрастает почти на порядок. Поскольку исследования проводятся поэтапно, то время до получения результата может составить от 1 до 10 дней. Каким может быть результат? «Иммуноблот отрицательный» — значит, что положительная реакция в ИФА — тестах была ложной или неспецифической, ВИЧ-инфекции нет. «Иммуноблот положительный» — в крови обнаружены антитела к ВИЧ, необходим четвертый, последний этап — повторный забор крови и повторное исследование, чтобы исключить техническую ошибку при заборе крови. Только после положительного результата по повторной сыворотке подводится окончательный итог — «антитела к ВИЧ — обнаружены», у человека — ВИЧ-инфекция.

Возможен еще один вариант результата: «иммуноблот сомнительный». Это означает, что сыворотка реагирует не со всеми, а с какими-то отдельными белками ВИЧ, нанесенными на нитроцеллюлозные полоски блота, т. е определяется только часть антител к белкам ВИЧ. Неопределенный результат может означать, что человек инфицирован ВИЧ, но еще не весь спектр антител выработан организмом. Нередко по прошествии 1–3–6 месяцев с момента получения сомнительного результата в сыворотке появляются одно за другим все антитела и ВИЧ. В этом случае сомнительный результат — свидетельство начальной стадии ВИЧ-инфекции. Или же, результат неопределенного иммуноблота показывает, что человек не инфицирован, но в его организме есть антитела похожие на истинные антитела к ВИЧ. Такой результат может быть у больных туберкулезом, онкобольных, реципиентов, получающих многократные гемотрансфузии (переливания крови), у беременных женщин. При неопределенном результате ИБ пациент находится под наблюдением врача-инфекциониста и повторяет анализ через 1, 3 и 6 месяцев.

Читайте также:  Что может быть на ранней стадии вич

Тестирование на ВИЧ проводится анонимно либо абсолютно конфиденциально. Сдать анализ можно в любой поликлинике или центральной районной больнице по месту жительства, а также в Центрах по профилактике и борьбе со СПИД. Учтите, что деньги за тестирование на ВИЧ с Вас могут взять только в учреждениях коммерческой медицины (платных клиниках). В государственных больницах и поликлиниках тестирование на ВИЧ по закону проводится бесплатно. Кроме того, до и после сдачи анализа Вам должны оказать консультационную медико-психологическую помощь. Проходя тестирование в Республиканском центре по профилактике и борьбе со СПИД любой человек имеет возможность обследоваться на ВИЧ анонимно и бесплатно, получить полное консультирование у инфекционистов и психологов как до, так и после прохождения теста.

Существует методика, позволяющая определять не антитела к вирусу ВИЧ, а сам вирус в организме, это методика ПЦР — полимеразной цепной реакции. Она доказала свою эффективность и используется для:

— определения наличия или отсутствия самого ВИЧ в «период окна», при неясном резуль-тате иммуноблота;
— для определения какой вирус присутствует в организме — ВИЧ-1 или ВИЧ-2;
— для назначения лечения АРВТ и контроля лечения;
— для определения ВИЧ-статуса новорожденных, родившихся от ВИЧ-инфицированных матерей.

ПЦР позволяет определить совсем незначительное количество вирусных частиц в зараженном материале. Но ее проведение требует сложного лабораторного оборудования и высокой квалификации специалистов. Метод очень дорогостоящий и в массовом тестировании на ВИЧ, которое согласно законодательству проводится для населения бесплатно, не применяется.

В экстренных ситуациях (во время операций по жизненным показаниям, родов) применяют «экспресс-тесты». Их проведение не требует сложного оборудования и высокой квалификации персонала. Результат экспресс-теста необходимо подтверждать стандартным тестированием на ВИЧ.

Существуют тесты, для постановки которых не требуется кровь. Эти тесты, работающие на пробах мочи или слюны, применялись только в экспериментальных программах, не сертифицированы и не разрешены в России для широкого практического применения. Пользоваться такими тестами «на дому» не следует, точный результат тестирования на ВИЧ могут гарантировать только специализированные СПИД-лаборатории.

Источник

Иммунный блоттинг в диагностике ВИЧ

Иммунный блоттинг (иммуноблот, Western Blot, вестерн-блот) — сочетает в себе иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим переносом на нитроцеллюлозную полоску (стрип) антигенов вируса.

В этом красивом ученом названии «blot» переводится скорее всего как «клякса», а «western» — как « западная» отражает направление распространения этой «кляксы» по бумаге слева направо, то есть на географической карте это соответствует направлению с запада на восток.». Суть метода «иммунный блот» заключается в том, что иммуноферментную реакцию проводят не со смесью антигенов, а с антигенами ВИЧ, предварительно распределенными методом иммунофореза по фракциям, располагающимся согласно молекулярному весу по поверхности нитроцеллюлозной мембраны. В результате основные белки ВИЧ, носители антигенных детерминант, распределяются по поверхности в виде отдельных полос, которые и проявляются при проведении иммуноферментной реакции.

Иммуноблот включает в себя несколько стадий:

Подготовка стрипа. Предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов вирус иммунодефицита (ВИЧ) подвергается электрофорезу, при этом входящие в состав ВИЧ антигены разделяются по молекулярному весу. Затем методом блоттинга (аналог выдавливания на «промокашку» избытка чернил) антигены переносят на полоску нитроцеллюлозы, которая отныне содержит невидимый пока глазом спектр антигенных полос, характерный для ВИЧ.

Исследование пробы. На нитроцеллюлозную полоску наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им (комплиментарными) антигенными полосами. В результате последующих манипуляций результат этого взаимодействия визуализируется — делается видимым.

Трактовка результата. Наличие полос в на определённых участках нитроцеллюлозной пластины подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ.

  • Полоска А — Положительный контроль

  • Полоска В — Слабоположительный контроль

  • Полоска С — Отрицательный контроль

  • Полоска D — Положительный образец (обнаружено присутствие антител к ВИЧ-1)

В настоящее время иммунный блоттинг (иммуноблот) является основным методом для подтверждения наличия вирусспецифических антител в исследуемой сыворотке. В некоторых случаях ВИЧ-инфекции, до развития сероконверсии, специфические антитела более эффективно выявляются методом иммунного блоттинга, чем ИФА. При исследовании методом иммунного блоттинга обнаружено, что чаще всего в сыворотках больных СПИДом выявляются антитела к gp 41, причем обнаружение р24 у лиц, обследуемых с профилактической целью, требует дополнительных исследований на наличие у них ВИЧ-инфекции. Тест-системы для иммунного блоттинга на основе рекомбинантных белков, полученных путем генной инженерии, оказались более специфичными, чем обычные системы на основе очищенного вирусного лизата. При использовании рекомбинантного антигена формируется не диффузная, а четко выраженная узкая полоска антигена, легко доступная для учета и оценки.

Сыворотки лиц, инфицированных ВИЧ-1, обнаруживают антитела к следующим основным белкам и гликопротеидам — структурным белкам оболочки (env) — gp160, gp120, gp41; ядра (gag) — p17, p24, p55, а также ферментов вируса (pol) — p31, p51, p66. Для ВИЧ-2 типичны антитела к env — gp140, gp105, gp36; gag — p16, p25, p56; pol — p68.

Читайте также:  Через что может передаваться вич

Среди лабораторных методов, необходимых для установления специфичности реакции, наибольшее признание имеет обнаружение антител к белкам оболочки ВИЧ-1- gp41, gp120, gp160, и ВИЧ-2 — gp36, gp105, gp140.

ВОЗ считает положительными сыворотки, в которых методом иммунного блотинга обнаруживаются антитела к каким-либо двум гликопротеидам ВИЧ. Согласно этим рекомендациям, при наличии реакции только с одним из белков оболочки (гп 160, гп 120, гп 41) в сочетании или без реакции с другими белками, результат считается сомнительным и рекомендуется повторное исследование, используя набор другой серии или другой фирмы. Если и после этого результат остается сомнительным, рекомендуется наблюдение в течение 6 месяцев (исследования через 3 месяца).

Наличие положительной реакции с антигеном p24 может указывать на период сероконверсии, так как антитела именно к этому белку иногда появляются первыми. В этом случае рекомендуется, в зависимости от клинических и эпидемиологических данных, повторить исследование с образцом сыворотки, взятым как минимум через 2 недели, и это является как раз тем случаем, когда при ВИЧ-инфекции необходимо исследование парных сывороток.

Положительные реакции с белками gag и pol без наличия реакции с белками env могут отражать стадию ранней сероконверсии, а также может указывать на ВИЧ-2 инфекцию или на неспецифическую реакцию. Лиц с такими результатами после тестирования на ВИЧ-2 повторно исследуют через 3 месяца (в течение 6 месяцев).

Источник

Все о тесте на ВИЧ: когда делать и какой лучше?

Если пцр на вич отрицательный а иммуноблот положительный

Чем отличается ИФА от ПЦР, и что эти аббревиатуры вообще значат? Через сколько тест точно покажет, есть у меня ВИЧ или нет? Где можно сдать? Ответы на эти и другие вопросы в разборе СПИД.ЦЕНТРа.

У каждого есть ВИЧ-статус, только у одних он положительный, а у других — отрицательный. Однако знать его необходимо, особенно в российских реалиях, когда в стране эпидемия, и уже более одного процента населения живет с вирусом.

Для диагностики вируса иммунодефицита человека существует несколько видов тестов, причем их классификация сложна лишь на первый взгляд, на самом деле она весьма логична. Главное — помнить, что, несмотря на высокую точность анализов, ни один тест не найдет вирус сразу после заражения.

Скрининговые (поисковые) тесты

Они помогают заподозрить инфекцию, но их результаты надо подтверждать другими анализами. Для скрининга используют тесты либо на антитела, либо на антигены/антитела.

ИФА (иммуноферментый анализ).

Этот метод служит не для обнаружения самого вируса, а антител, которые наша иммунная система вырабатывает для борьбы с ним.

Делают его следующим образом: на очищенные части вируса (антигены), зафиксированные в специальной лунке, наносят кровь. Если в ней есть антитела, то образуются иммунные комплексы антиген/антитело, которые вступают в реакцию с красителем, приводя к изменению цвета. Это оценивается качественно (есть/нет реакции) и/или количественно при помощи дополнительной аппаратуры.

Существует несколько поколений ИФА:

  • В первом поколении тестов использовался сам вирус, обработанный ультразвуком, при этом определялись антитела только ВИЧ-1. Анализ обладал невысокой чувствительностью и специфичностью.
  • ИФА второго поколения научили определять антитела как к ВИЧ-1, так и к ВИЧ-2. Материалом служили синтезированные белки, аналогичные настоящим антигенам вируса. Впрочем, тесты первого и второго поколения давно не используются.
  • Следом появились тесты третьего поколения, которые позволяют диагностировать длительно текущую (хроническую) ВИЧ-инфекцию с чувствительностью и специфичностью около 100 %. Однако при острой ВИЧ-инфекции (когда антител мало или совсем нет) их точность считается недостаточной.

Современный ИФА позволяет обнаружить антитела, появляющиеся в крови с 30-го (цифры согласно клиническим рекомендациям Минздрава) дня инфицирования (по данным Центра контроля и профилактики заболеваний в США CDC — c 23 по 90 день).

по теме

Если пцр на вич отрицательный а иммуноблот положительный

Лечение

Как устроены ВИЧ и АРВТ? Объясняем на пальцах

За счет своей простоты и дешевизны этот метод используется чаще всего, в том числе на его основе работают экспресс-тесты.

Если такой тест оказался положительным, результат перепроверяется на тест-системе другого производителя, и в случае положительного результата применяется иммуноблот (смотри ниже).

Самое последнее поколение ИФА — четвертое. И оно уже позволяет проводить комбинированный анализ, одновременно проверяя: есть ли в крови белковые «обломки» ВИЧ (антигены), а также антитела.

Примечательно, что антиген р24 появляется в крови уже через 15 дней (по данным CDC — с 18 по 45 день) после инфицирования ВИЧ, поэтому такой вид анализа позволяет диагностировать ВИЧ-инфекцию раньше.

Так, эксперты из CDC считают комбинированные тесты наиболее предпочтительными для массового клинического использования. А российский Минздрав рекомендует его применять в качестве скринингового в большинстве лабораторий страны. Однако после получения положительного результата его также нужно перепроверять иммуноблоттингом.

Существуют два вида вируса ВИЧ — 1 и 2. В мире наиболее распространен ВИЧ-1. Разновидности вируса различаются по генетическому материалу, по-разному взаимодействуют с иммунитетом и отвечают на лечение.

Подтверждающие тесты

Как следует из названия, они позволяют наверняка убедиться в наличии или отсутствии вируса иммунодефицита у человека. Их минус в сложности и дороговизне.

Иммуноблоттинг помогает проверить результаты скрининговых анализов и уточнить, каким видом вируса инфицирован человек: ВИЧ-1, ВИЧ-2 или обоими. Этот метод обладает высокой точностью, чувствительностью, но дорог и сложен в исполнении. Он является комбинацией ИФА и электрофореза, что позволяет определить антитела к специфическим антигенам ВИЧ-1 (gp160, gp120, gp41). Белки под действием электрического поля располагаются в виде полосок на нитроцеллюлозной мембране.

Читайте также:  Как вылечить в домашних условиях вич

При положительной реакции антиген/антитело на полосках становится видно потемнение.

ПЦР (полимеразная цепная реакция). Тест способен находить генетический материал ВИЧ (ДНК/РНК), то есть проверяет, есть ли непосредственно вирус в крови. Нуклеиновые кислоты могут обнаруживаться уже на 7-й день после инфицирования (по данным CDC — c 10 по 33 день).

При этом методе в пробирке с помощью различных ферментов многократно дублируется участок ДНК или РНК вируса до таких объемов, что его можно увидеть глазом в виде полосок. Кроме того, ПЦР бывает качественным и количественным. В последнем случае можно отслеживать вирусную нагрузку (концентрацию вируса в крови и других биологических жидкостях) у людей с ВИЧ, оценивая эффект терапии.

А я могу сдать сразу иммуноблот или ПЦР, чтобы узнать свой ВИЧ-статус?

Иммуноблот используют специальные лаборатории центров по борьбе со СПИДом. Пробы крови направляются туда для перепроверки уже положительных первичных скрининговых анализов. Сразу сдать его не получится, даже в платных клиниках.

ПЦР, наоборот, можно сдать в любой момент, но только обратившись в коммерческую лабораторию. В СПИД-центрах его делают также для перепроверки ранее положительного теста. Да, ПЦР позволяет максимально быстро (в течение 7—10 дней после инфицирования) обнаружить ВИЧ, но и у него есть недостатки:

  • высокая стоимость;
  • может обнаружить только ВИЧ-1;
  • в редких случаях выявление низких уровней РНК ВИЧ (например, <1000 копий/мл) может привести к ложноположительному результату.

Этот тест имеет смысл делать если:

  • у человека есть подозрение на острую ВИЧ-инфекцию (высокий риск инфицирования) или в период серологического окна;
  • донорам крови;
  • новорожденным от ВИЧ-положительных матерей

Как тогда правильно проверяться на ВИЧ?

Согласно рекомендациям Минздрава, первоначальным анализом должен быть скрининговый тест ИФА. Если результат оказывается положительным, то в лаборатории, используя тот же образец крови, делают еще один анализ. Если и он «с плюсом», то тогда уже проводят иммуноблот.

Нужно ли повторно тестироваться, если результат анализа отрицательный?

Универсальной рекомендации, увы, нет. Повторные тесты нужны чтобы застраховаться от попадания в период окна, когда в крови еще нет антител и антигенов ВИЧ, а вирус уже проник в организм.

То же самое и с частотой тестирования — она зависит от разных факторов: количества рисков, приема доконтактной (PrEP) и постконтактной (PEP) профилактики, нахождения в группах риска (инъекционные наркопотребители, секс-работники, мужчины, практикующие секс с мужчинами). Однако эксперты рекомендуют проверяться каждые 6—12 месяцев.

Если пцр на вич отрицательный а иммуноблот положительный

Что может влиять на результат теста на ВИЧ?

Анализ на ВИЧ может дать неправильные результаты в следующих случаях:

  • при наличии системных аутоиммунных заболеваний (коллагенозов, васкулитов) и злокачественных опухолей;
  • при тестировании в период серологического окна — когда в крови еще не появились антитела к ВИЧ;
  • из-за ошибки при проведении теста в лаборатории;
  • после вакцинации от гриппа.

У детей, рожденных от ВИЧ-положительных матерей, до восемнадцатимесячного возраста в крови могут сохраняться материнские антитела, что может приводить к ложноположительным результатам.

по теме

Если пцр на вич отрицательный а иммуноблот положительный

Профилактика

Меньше знаешь — крепче СПИД

Кроме того, прием PrEP и PEP могут влиять на точность анализов, так как антиретровирусные препараты уменьшают количество вируса в крови и антител к нему.

В случае с PEP после окончания курса рекомендуется посоветоваться с врачом и подобрать оптимальные сроки проведения анализов. Первый тест обычно проводят через 4—6 недель после контакта с ВИЧ, затем через 3 месяца, при необходимости — через 6 месяцев.

Считается, что крайне важно сдать анализ на ВИЧ перед началом приема PrEP и затем проверяться каждые 3 месяца, уже находясь на PrEP.

На результаты теста не влияют прием пищи и алкоголя или курение. Специальной подготовки перед сдачей анализов на ВИЧ не требуется.

А что с экспресс-тестами?

Они позволяют провериться на ВИЧ, не посещая лабораторию или поликлинику. По сути, это тесты ИФА третьего поколения, которые определяют антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в слюне, моче или крови.

Их рекомендуют делать через три месяца после возможного риска инфицирования (чтобы избежать попадания в «окно»). Но считаются достоверными они с 30-го дня предполагаемого заражения (период появления антител).

Если пцр на вич отрицательный а иммуноблот положительныйНа рисунке показано, как быстро в крови появляются сам вирус (его генетический материал РНК) антитела и антигены, а также какие системы тестирования можно применить.

Точность большинства экспресс-тестов при хронической (длительно текущей) ВИЧ-инфекции достаточно высока (> 99 % чувствительности и специфичности), но все равно чуть ниже лабораторных анализов.

Сегодня среди них наиболее популярны тесты слюны (или околодесневой жидкости) и крови. Их можно либо купить самому, либо получить бесплатно в ВИЧ-сервисных организациях.

Если вы сделали экспресс-тест и он оказался положительным, необходимо его перепроверить более точным методом.

Где я могу сделать тест на ВИЧ анонимно и бесплатно?

Можно пойти в местный СПИД-центр, кабинеты анонимного консультирования или в некоммерческие организации (например, фонд «СПИД.ЦЕНТР»). Анализ на ВИЧ бесплатный и анонимный, прикрепление к поликлинике и регистрация не требуются. После сдачи теста выдается идентификационный номер, по которому можно будет узнать результат.

Источник