Геном гепатита с в инвитро

Мутации лекарственной резистентности NS3, NS5A и NS5B регионов генома вируса гепатита С, генотипы 1a, 1b или 3 (Hepatitis C virus (HCV) NS3, NS5A, NS5B drug resistance-associated variants (RAVs), 1a, 1b or 3 genotypes),

Метод определенияполимеразная цепная реакция (ПЦР), секвенирование по Сэнгеру. Выявляют и идентифицируют кодонные замены в геномных регионах NS3, NS5A и NS5 вируса гепатита С. Регистрируют клинически значимые мутации резистентности, с порогом >15% популяции.

Исследуемый материалЦельная кровь (с ЭДТА)

Выявление полиморфизмов NS3/NS5A/NS5B геномных регионов вируса гепатита С, ассоциированных с возможной резистентностью к терапии препаратами прямого противовирусного действия (для пациентов с генотипом вируса 1a, 1b или 3). 

Вирусный гепатит C (ВГС) – инфекционное заболевание печени, вызываемое РНК-содержащим вирусом, склонное к длительному хроническому течению с риском развития цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы. В терапии этого заболевания за последние годы достигнуты прорывные успехи – она стала эффективнее, проще, с меньшим числом побочных эффектов. 

Терапией выбора при ВГС являются препараты прямого противовирусного действия (ПППД), воздействующие непосредственно на ферменты вируса, способные приводить к его полной элиминации. ПППД делятся на 3 основных класса – ингибиторы протеазы региона NS3/4A (участвует в посттрансляционной модификации вируса), ингибиторы белка NS5A (компонент репликационного комплекса вируса) и ингибиторы фермента NS5B (РНК-полимераза вируса). Действие таких лекарственных средств приводит к остановке деления вируса и препятствует заражению новых клеток. Однако, несмотря на высокую эффективность этих препаратов, примерно у 5% больных лечение с применением ПППД оказывается неэффективным. Установлена важная роль в этом ассоциированных с лекарственной резистентностью мутаций вируса. 

При применении таргетированных препаратов важно понимать механизм появления таких мутаций. Одной из важных характеристик вируса гепатита С является высокая скорость репликации в сочетании с интенсивной генетической изменчивостью и коротким полупериодом жизни вириона. «Ошибки» транскрипции возможны при каждом цикле репликации вируса. Они приводят к изменениям структуры вирусных белков, что может по-разному влиять на их свойства. В том числе, возможны случайные аминокислотные замены в структуре белков NS3, NS5A, NS5B, при которых они сохранят свои функции, но не будут столь же эффективно ингибироваться соответствующим ПППД. Все возможные вариации вируса с единичными заменами могут появляться многократно за 1 сутки, при исследовании резистентности рекомендуется регистрировать клинически значимые мутации, представленные в >15% популяции. Вероятность обнаружения таких мутаций выше у пациентов с ранее неуспешной терапией, чем у тех, кто еще не получал терапии – доля резистентных вариантов в вирусной популяции возрастает по принципам естественного отбора на фоне проводимой терапии, особенно при субоптимальных дозах. 

Наиболее часты мутации в регионе NS5A при генотипах вируса 1а и 3. Степень резистентности к препарату может варьировать в зависимости от позиции полиморфизма. Клиническое значение выявленной мутации резистентности соотносится с определенным классом ПППД, иногда — конкретным препаратом, а также генотипом вируса, клиническими характеристиками пациента (по факту предыдущего лечения, наличию цирроза) и планируемым режимом комбинированной терапии. 

Для клинической интерпретации полученных результатов следует ориентироваться на текущие рекомендации экспертных сообществ по лечению ВГС и информацию о значимых мутациях в рекомендациях по применению соответствующего препарата. Резистентность к одному препарату может компенсироваться активностью другого при использовании лечения комбинациями ПППД разных классов или увеличением длительности лечения. В условиях свободного доступа к разным режимам терапии, позволяющим оптимизировать лечение для лиц групп повышенного риска лекарственной резистентности, проводить исследования связанных мутаций вируса обычно не требуется. Однако, в условиях ограниченной доступности препаратов такие исследования могут быть полезны для выбора тактики терапии (EASL 2016, 2018).

Литература

  1. Ющук с соавт. Рекомендации по диагностике и лечению взрослых больных гепатитом С. 3-е изд., исправленное и дополненное. ГЭОТАР-Медиа, 2017, 96 с. 
  2. EASL ations on Treatment of Hepatitis C 2016. EASL ations on Treatment of Hepatitis C 2016. J Hepatol (2016), https://dx.doi.org/10.1016/j.jhep.2016.09.001  
  3. EASL ations on treatment of hepatitis C 2018. J Hepatol. 2018;69(2):461‐511.  
  4. AASLD-IDSA HCV Guidance Panel. Hepatitis C Guidance 2018 Up: AASLD-IDSA ations for Testing, Managing, and Treating Hepatitis C Virus Infection. Clin Infect Dis. 2018 Oct 30;67(10):1477-1492. 
  5. AASLD-IDSA HCV Guidance: ations for Testing, Managing, and Treating Hepatitis C https://www.hcvguidelines.org/ 
  6. Pawlotsky JM. Hepatitis C Virus Resistance to Direct-Acting Antiviral Drugs in Interferon-Free Regimens. Gastroenterology. 2016 Jul;151(1):70-86.  
  7. Wyles D. L., Luetkemeyer A.F. Understanding Hepatitis C Virus Drug Resistance: Clinical Implications for Current and Future Regimens. HCV Drug Resistance. 2017, Vol. 25, 3, pp.103-109. 
  8. Информация по применению соответствующих препаратов.
Читайте также:  У мужа гепатит почему нет у меня

Источник

Anti-HCV-total (антитела к антигенам вируса гепатита C)

Метод определенияХемилюминесцентный иммуноанализ

Исследуемый материалСыворотка крови

Синонимы: Суммарные антитела к вирусу гепатита С; анти-HCV. 

 Anti-HCV IgG/IgM; Antibodies to Hepatitis C Virus, IgM + IgG; HCVAb, Total. 

Характеристика показателя Anti-HCV-total (антитела к антигенам вируса гепатита C суммарные) 

Внимание!При положительных и сомнительных реакциях срок выдачи результата может быть увеличен до трех рабочих дней. 

Геном вируса гепатита C кодирует разные структурные и неструктурные вирусные белки. К каждому из них в ходе защитного иммунного ответа организма могут образовываться антитела, циркулирующие в крови в вариабельном составе. В тесте анти-HCV-total определяется присутствие антител к комплексу структурных и неструктурных белков вируса гепатита C суммарно классов IgM и IgG. Анти-HCV, при субклиническом варианте течения гепатита C, появляются большей частью спустя 4-10 недель после инфицирования (серонегативный период), обычно позже увеличения АЛТ, и в дальнейшем могут определяться постоянно, в том числе, сохраняются долгие годы и после спонтанного разрешения инфекции или успешного лечения. Обнаружение суммарных антител к вирусу гепатита С свидетельствует о том, что человек был инфицирован вирусом гепатита C, может иметь скрытую инфекцию и потенциально способен к передаче инфекции. 

Вирусный гепатит С – описание, алгоритм лабораторного тестирования 

Вирусный гепатит C (ВГС) – инфекционное заболевание печени, которое вызывает РНК-содержащий вирус семейства Flaviviridae – вирус гепатита C (ВГС, HCV, Hepatitis C Virus). Это одна из основных причин хронической патологии печени. 

Пути передачи инфекции 

Основной путь передачи HCV – гемоконтактный – передача инфекции через кровь или ее компоненты. Ведущее эпидемиологическое значение при гепатите C имеют искусственные пути передачи возбудителя, которые реализуются при проведении немедицинских и медицинских манипуляций, сопровождаемых повреждением кожи или слизистых оболочек, а также манипуляций, связанных с риском их повреждения: 

  • при немедицинских манипуляциях, сопровождаемых повреждением кожи или слизистых оболочек, перенос инфекции происходит при инъекционном введении наркотических средств (наибольший риск), нанесении татуировок, пирсинге, ритуальных обрядах, проведении косметических, маникюрных, педикюрных и других процедур с использованием контаминированных вирусом гепатита C инструментов; 
  • при медицинских манипуляциях: переливании крови или ее компонентов (в настоящее время редко в связи с эффективным контролем), пересадке органов или тканей, процедуре гемодиализа (высокий риск), через медицинский инструментарий для парентеральных вмешательств, лабораторный инструментарий и другие изделия медицинского назначения, контаминированные вирусом гепатита C. Инфицирование вирусом гепатита C иногда возможно также при эндоскопических исследованиях и других диагностических и лечебных процедурах, в ходе проведения которых существует риск нарушения целостности кожных покровов или слизистых оболочек; 
  • перенос может происходить при попадании крови (ее компонентов) и других биологических жидкостей, содержащих вирус гепатита C, на слизистые оболочки или раневую поверхность кожи; 
  • передача вируса возможна при половых контактах, в процессе которых имеет место контакт с кровью через поврежденные слизистые. Риск значительно выше при гомосексуальных контактах между мужчинами. Более редким явлением является передача вируса половым путем среди постоянных гетеросексуальных партнеров (в отсутствие иных факторов риска при болезни одного из партнеров хроническим гепатитом С риск заражения другого составляет 1,5%); 
  • возможна передача вируса от инфицированной матери ребенку во время беременности и родов, но вероятность этого низка (риск составляет 1-5%) и зависит от уровня вирусной нагрузки у женщины. 

Гепатит С не передается через грудное молоко, пищевые продукты, воду или при бытовых контактах – объятиях, поцелуях, совместном приеме пищи или напитков. 

Течение инфекции 

Вирусный гепатит С имеет склонность к длительному хроническому течению с риском развития цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы, характеризуется наличием вирусемии при полном или почти полном отсутствии клинической симптоматики. Среди пациентов, у которых присутствуют клинические симптомы острого гепатита, чаще отмечают желтуху, темную мочу и светлый стул, абдоминальные боли. Предполагается, что переход инфекции в хроническую форму происходит примерно у 2/3 пациентов, точную статистику уровня хронизации сложно установить, поскольку ранние стадии гепатита С обычно бессимптомны или не распознаются. Скрытая инфекция может продолжаться на протяжении десятилетий. В течение этого периода инфицированные обычно считают себя здоровыми, единственной жалобой может быть незначительная тяжесть в правом подреберье, которая возникает при нарушении режима питания и физических нагрузках. Болезнь манифестирует морфологически некротическими, воспалительными и фибротическими изменениями печеночной ткани различной степени тяжести. Повреждение печени может варьировать от минимальных гистологических изменений до обширного фиброза и цирроза с гепатоцеллюлярной карциномой или без нее. По оценкам ВОЗ, риск развития цирроза у пациентов с хроническим гепатитом С в течение 20 лет составляет от 15 до 30%. За последние годы достигнуты прорывные успехи в лечении хронического гепатита С – современные варианты противовирусной терапии стали значительно эффективнее, проще, с меньшим количеством побочных эффектов. Они позволяют добиться излечения у подавляющего большинства пациентов и избежать развития повреждений печени при своевременном применении. 

Читайте также:  Гепатит с дал бы о себе знать

Генотипы HCV 

Важной особенностью возбудителя вирусного гепатита С является его генетическая неоднородность. В настоящее время известно семь генотипов HCV, c большим числом субтипов, они имеют разную географическую распространенность. В России распространены (в порядке убывания) преимущественно генотипы 1, 3, 2. Среди субтипов, аналогично европейской популяции, чаще встречается 1b, чем 1a, а также 3a. Прогноз течения, ответа на терапию, вероятность возникновения резистентных штаммов отличаются для разных генотипов/субтипов HCV, поэтому их идентификация имеет значение при выборе противовирусной терапии и определении продолжительности лечения. 

В организме инфицированного человека вирус гепатита С способен быстро мутировать с образованием новых штаммов, которые слегка отличаются по структуре вирусных белков, с чем связывают его способность ускользать от иммунной защиты и высокую частоту хронизации. Хронический гепатит С характеризуется, с одной стороны, постоянной репликацией вируса, с другой – активным, но недостаточным иммунным ответом организма. 

Алгоритм лабораторного тестирования при подозрении на хроническую инфекцию вирусом гепатита С 

К основным методам лабораторной диагностики гепатита С относятся исследование суммарных антител к HCV методом иммуноанализа (тест № 

79

) и определение вирусной РНК в крови обследуемого методом ПЦР (тесты № 

321СВ

, № 

350СВ

, № 

323ПЛ

). 

 При положительном результате скринингового теста на суммарные антитела к HCV, для подтверждения текущей инфекции ВГС следует провести определение вирусной РНК в крови высокочувствительным ПЦР-методом (тест № 

321СВ

). Если диагноз хронического гепатита С в результате проведенных исследований установлен, помимо рутинных биохимических и общеклинических лабораторных тестов, для оценки состояния печени используют биопсию печени и гистологическое исследование биоптата («золотой стандарт») либо неинвазивные методы оценки состояния печени, в том числе с определением комплекса непрямых лабораторных маркеров фиброза и некровоспалительного процесса и последующей программной обработкой данных (профиль Фибротест). В целях прогноза течения, а также выбора тактики и режима лекарственной противовирусной терапии, следует провести исследование генотипа HCV (тесты № 

324

, № 

1688

), перед началом лечения оценить вирусную нагрузку (количественная оценка РНК HCV в крови, тесты № 

350СВ

, № 

323ПЛ

). При необходимости (в зависимости от истории пациента и варианта доступной терапии) может быть целесообразным исследование мутаций лекарственной резистентности определенных геномных регионов HCV (тест № 

7644G1

) при планировании терапии препаратами прямого противовирусного действия или определение полиморфизмов гена интерлейкина IL28b (тест № 

2447

) при планировании терапии с применением препаратов интерферона. Для контроля ответа на противовирусную терапию и оценки ее эффективности по окончании используют количественную оценку РНК HCV (тесты № 

350СВ

, № 

323ПЛ

). 

Подробнее алгоритм лабораторного тестирования при подозрении на инфекцию HCV см. 

здесь

. 

В каких целях используют исследование суммарных антител к гепатиту С 

Определение суммарных антител к антигенам вируса гепатита С используют для первичного скрининга хронической HCV-инфекции, часто протекающей практически бессимптомно. Отрицательный результат этого скринингового теста обычно свидетельствует об отсутствии инфицирования. 

Однако следует учитывать особые обстоятельства. 

Антитела к вирусу гепатита C могут не определяться на ранней фазе инфекции (серонегативный период) или быть ниже уровня детекции у лиц с выраженными нарушениями функций иммунной системы. Поэтому при вероятности недавнего заражения или клинических и лабораторных признаках острого гепатита (повышение уровня печеночных ферментов, билирубина), а также при обследовании пациентов с иммунной депрессией, пациентов на гемодиализе – скрининг целесообразно дополнять исследованием вирусной РНК в крови методом ПЦР. Отрицательный результат этих двух тестов (определение специфических антител и вирусной РНК) свидетельствует о том, что инфекция маловероятна. 

У детей, рожденных от матерей с HCV-инфекцией, исследование на антитела (для оценки возможного переноса инфекции) нецелесообразно проводить в течение 18 месяцев после рождения. Скрининг следует отложить на более поздний период, поскольку выявленные в крови ребенка в первые месяцы после рождения антитела могут быть материнского происхождения (антитела класса IgG легко проникают через плаценту). При необходимости более ранней диагностики в первый год жизни более информативен тест на вирусную РНК методом ПЦР.

Читайте также:  Можно ли делать прививку от гепатита в при носительстве гепатита с

Литература

  1. Гепатит С. Материалы сайта ВОЗ. https://www.who.int/ru/news-room/fact-sheets/detail/hepatitis-c 
  2. Профилактика вирусного гепатита С. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.3112-13. https://www.rospotrebnadzor.ru/documents/ 
  3. Шестакова И. В., Эсауленко Е. В., Сухорук А. А. Хронический вирусный гепатит С (ХВГС) у взрослых. – 2016. https://nnoi.ru/uploads/files/kr380_gepatit_s_2019.pdf 
  4. European Association for The Study of The Liver et al. EASL ations on treatment of hepatitis C 2018 //Journal of hepatology. – 2018. – Т. 69. – №. 2. – С. 461-511. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0168827818319688 
  5. Panel A. I. H. C. V. G. Hepatitis C guidance 2018 up: AASLD-IDSA ations for testing, managing, and treating hepatitis C virus infection //Clinical infectious diseases: an official publication of the Infectious Diseases Society of America. – 2018. – Т. 67. – №. 10. – С. 1477. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7190892/ 
  6. Материалы сайта UpTo.com (электронный ресурс доказательной медицинской информации для клиницистов) https://www.upto.com/home/evidence-based-medicine

Источник

Вирус гепатита С, определение РНК кол. (HCV-RNA, quantitative) в плазме крови

Cтоимость анализов указана без учета взятия биоматериала

Метод определенияПЦР с детекцией в режиме «реального времени».

Исследуемый материалПлазма крови (ЭДТА)

Определение РНК вируса гепатита С (оценка вирусной нагрузки) в плазме крови методом ПЦР с детекцией в режиме реального времени. Исследование выполняется на оборудовании компании Hoffmann-La Roche (Швейцария) по стандартизованной технологии с автоматизированной пробоподготовкой.

Аналитические показатели

Определяемый фрагмент – специфический участок РНК вируса гепатита С. Клиническая специфичность теста: 100%, при доверительном интервале 99,6-100%. Линейный диапазон теста 15 – 100000000 МЕ/мл. Анализируются генотипы 1- 6 (1, 2, 3, 4, 5, 6). Чувствительность теста составляет 15 МЕ/мл.

Количественная характеристика содержания РНК гепатита С в клинических образцах важна для оценки эффективности противовирусной терапии и имеет прогностическое значение для определения хронизации этого гепатита. Если концентрация вируса меньше 8х10^5 МЕ/мл, то прогноз курса лечения благоприятный, если выше, то необходимо использовать другие схемы лечения. Вирусная нагрузка ниже 8х10^5 МЕ/мл наряду с определением генотипа вируса является независимым и наиболее информативным параметром прогнозирования эффективности лечения. Снижение концентрации РНК гепатита С к третьему дню от начала терапии на 85% является быстрым и точным параметром для предсказания эффективности терапии, приводящей к раннему вирусологическому ответу.

Специальной подготовки к исследованию не требуется. С общими рекомендациями для подготовки к исследованиям можно ознакомиться здесь >>.

  • Положительный качественный тест на наличие РНК вируса гепатита С в крови.
  • Определение тактики лечения пациентов.
  • Точная оценка эффективности лечения.

Внимание: тест не предназначен для скрининга на гепатит С крови и ее продуктов или для подтверждающей диагностики HCV-инфекции.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения: количество выявленной РНК вируса гепатита C, выраженное в МЕ/мл.

Альтернативные варианты: для представления числа МЕ/мл могут быть использованы разные математические символы, например: 

69 000 000 = 6,9*107 = 6,9*10^7=6,9E7=7,8lg 

690 000 000 = 6.9*108 =6.9*10^8 = 6.9E8=8.8lg.

Интерпретация результата:

  • «не обнаружено»: РНК вируса гепатита С не выявлена или значение ниже предела чувствительности метода (15 МЕ/мл). Результат интерпретируют как «РНК вируса гепатита С не выявлена;  
  • от 15 до 100000000 МЕ/мл: «РНК вируса гепатита С выявлена», полученное значение находится в пределах линейного диапазона, результат достоверен;
  • > 100000000 МЕ/мл: результат интерпретируется как: результат интерпретируется как: «РНК вируса гепатита С выявлена в указанной концентрации, выходящей за пределы линейного диапазона, тест ставился в разведении 1:Х».

Обращаем внимание, что сроки выполнения ПЦР-исследований могут быть увеличены при проведении подтверждающих тестов.

Артикул:323ПЛ

Срок исполнения:

до 10 рабочих дней ?

Указанный срок не включает день взятия биоматериала

Цена:10 590 руб

Взятие крови из вены:

  • + 220 руб

В этом разделе вы можете узнать, сколько стоит выполнение данного исследования в вашем городе, ознакомиться с описанием теста и таблицей интерпретации результатов. Выбирая, где сдать анализ «Вирус гепатита С, определение РНК кол. (HCV-RNA, quantitative) в плазме крови» в Москве и других городах России, не забывайте, что цена анализа, стоимость процедуры взятия биоматериала, методы и сроки выполнения исследований в региональных медицинских офисах могут отличаться.

Источник