Иммунный блоттинг при вич инфекции

Содержание статьи

Иммунный блоттинг в диагностике ВИЧ

Иммунный блоттинг (иммуноблот, Western Blot, вестерн-блот) — сочетает в себе иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим переносом на нитроцеллюлозную полоску (стрип) антигенов вируса.

В этом красивом ученом названии «blot» переводится скорее всего как «клякса», а «western» — как « западная» отражает направление распространения этой «кляксы» по бумаге слева направо, то есть на географической карте это соответствует направлению с запада на восток.». Суть метода «иммунный блот» заключается в том, что иммуноферментную реакцию проводят не со смесью антигенов, а с антигенами ВИЧ, предварительно распределенными методом иммунофореза по фракциям, располагающимся согласно молекулярному весу по поверхности нитроцеллюлозной мембраны. В результате основные белки ВИЧ, носители антигенных детерминант, распределяются по поверхности в виде отдельных полос, которые и проявляются при проведении иммуноферментной реакции.

Иммуноблот включает в себя несколько стадий:

Подготовка стрипа. Предварительно очищенный и разрушенный до составных компонентов вирус иммунодефицита (ВИЧ) подвергается электрофорезу, при этом входящие в состав ВИЧ антигены разделяются по молекулярному весу. Затем методом блоттинга (аналог выдавливания на «промокашку» избытка чернил) антигены переносят на полоску нитроцеллюлозы, которая отныне содержит невидимый пока глазом спектр антигенных полос, характерный для ВИЧ.

Исследование пробы. На нитроцеллюлозную полоску наносится исследуемый материал (сыворотка, плазма крови пациента и т.п.), и если в пробе есть специфические антитела, то они связываются со строго соответствующими им (комплиментарными) антигенными полосами. В результате последующих манипуляций результат этого взаимодействия визуализируется — делается видимым.

Трактовка результата. Наличие полос в на определённых участках нитроцеллюлозной пластины подтверждает присутствие в исследованной сыворотке антител к строго определённым антигенам ВИЧ.

Полоска А — Положительный контроль
Полоска В — Слабоположительный контроль
Полоска С — Отрицательный контроль
Полоска D — Положительный образец (обнаружено присутствие антител к ВИЧ-1)

В настоящее время иммунный блоттинг (иммуноблот) является основным методом для подтверждения наличия вирусспецифических антител в исследуемой сыворотке. В некоторых случаях ВИЧ-инфекции, до развития сероконверсии, специфические антитела более эффективно выявляются методом иммунного блоттинга, чем ИФА. При исследовании методом иммунного блоттинга обнаружено, что чаще всего в сыворотках больных СПИДом выявляются антитела к gp 41, причем обнаружение р24 у лиц, обследуемых с профилактической целью, требует дополнительных исследований на наличие у них ВИЧ-инфекции. Тест-системы для иммунного блоттинга на основе рекомбинантных белков, полученных путем генной инженерии, оказались более специфичными, чем обычные системы на основе очищенного вирусного лизата. При использовании рекомбинантного антигена формируется не диффузная, а четко выраженная узкая полоска антигена, легко доступная для учета и оценки.

Сыворотки лиц, инфицированных ВИЧ-1, обнаруживают антитела к следующим основным белкам и гликопротеидам — структурным белкам оболочки (env) — gp160, gp120, gp41; ядра (gag) — p17, p24, p55, а также ферментов вируса (pol) — p31, p51, p66. Для ВИЧ-2 типичны антитела к env — gp140, gp105, gp36; gag — p16, p25, p56; pol — p68.

Среди лабораторных методов, необходимых для установления специфичности реакции, наибольшее признание имеет обнаружение антител к белкам оболочки ВИЧ-1- gp41, gp120, gp160, и ВИЧ-2 — gp36, gp105, gp140.

ВОЗ считает положительными сыворотки, в которых методом иммунного блотинга обнаруживаются антитела к каким-либо двум гликопротеидам ВИЧ. Согласно этим рекомендациям, при наличии реакции только с одним из белков оболочки (гп 160, гп 120, гп 41) в сочетании или без реакции с другими белками, результат считается сомнительным и рекомендуется повторное исследование, используя набор другой серии или другой фирмы. Если и после этого результат остается сомнительным, рекомендуется наблюдение в течение 6 месяцев (исследования через 3 месяца).

Наличие положительной реакции с антигеном p24 может указывать на период сероконверсии, так как антитела именно к этому белку иногда появляются первыми. В этом случае рекомендуется, в зависимости от клинических и эпидемиологических данных, повторить исследование с образцом сыворотки, взятым как минимум через 2 недели, и это является как раз тем случаем, когда при ВИЧ-инфекции необходимо исследование парных сывороток.

Положительные реакции с белками gag и pol без наличия реакции с белками env могут отражать стадию ранней сероконверсии, а также может указывать на ВИЧ-2 инфекцию или на неспецифическую реакцию. Лиц с такими результатами после тестирования на ВИЧ-2 повторно исследуют через 3 месяца (в течение 6 месяцев).

Источник

Иммунный блоттинг в диагностике ВИЧ

Иммуноблот включает в себя несколько стадий:

Полоска А — Положительный контроль
Полоска В — Слабоположительный контроль
Полоска С — Отрицательный контроль
Полоска D — Положительный образец (обнаружено присутствие антител к ВИЧ-1)

Источник

Все о тесте на ВИЧ: когда делать и какой лучше?

Скрининговые и подтверждающие тесты. Иммуноблоттинг, ИФА и ПЦР. Точность экспресс-тестов и адреса для анонимного тестирования.

У каждого есть ВИЧ-статус, только у одних он положительный, а у других — отрицательный. Однако знать его необходимо, особенно в российских реалиях, когда в стране эпидемия, и уже более одного процента населения живет с вирусом.

Для диагностики вируса иммунодефицита человека существует несколько видов тестов, причем их классификация сложна лишь на первый взгляд, на самом деле она весьма логична. Главное — помнить, что, несмотря на высокую точность анализов, ни один тест не найдет вирус сразу после заражения.

Скрининговые (поисковые) тесты

Они помогают заподозрить инфекцию, но их результаты надо подтверждать другими анализами. Для скрининга используют тесты либо на антитела, либо на антигены/антитела.

ИФА (иммуноферментый анализ).

Этот метод служит не для обнаружения самого вируса, а антител, которые наша иммунная система вырабатывает для борьбы с ним.

Существует несколько поколений ИФА:

В первом поколении тестов использовался сам вирус, обработанный ультразвуком, при этом определялись антитела только ВИЧ-1. Анализ обладал невысокой чувствительностью и специфичностью.
ИФА второго поколения научили определять антитела как к ВИЧ-1, так и к ВИЧ-2. Материалом служили синтезированные белки, аналогичные настоящим антигенам вируса. Впрочем, тесты первого и второго поколения давно не используются.
Следом появились тесты третьего поколения, которые позволяют диагностировать длительно текущую (хроническую) ВИЧ-инфекцию с чувствительностью и специфичностью около 100 %. Однако при острой ВИЧ-инфекции (когда антител мало или совсем нет) их точность считается недостаточной.

Современный ИФА четвертого поколения позволяет обнаружить антитела, появляющиеся в крови с 30-го (цифры согласно клиническим рекомендациям Минздрава) дня инфицирования (по данным Центра контроля и профилактики заболеваний в США CDC — c 23 по 90 день). Он проводит комбинированный анализ, одновременно проверяя: есть ли в крови белковые «обломки» ВИЧ (антигены), а также антитела.

За счет своей простоты и дешевизны этот метод используется чаще всего, в том числе на его основе работают экспресс-тесты.

Подтверждающие тесты

Как следует из названия, они позволяют наверняка убедиться в наличии или отсутствии вируса иммунодефицита у человека. Их минус в сложности и дороговизне.

Иммуноблоттинг помогает проверить результаты скрининговых анализов и уточнить, каким видом вируса инфицирован человек: ВИЧ-1, ВИЧ-2 или обоими. Этот метод обладает высокой точностью, чувствительностью, но дорог и сложен в исполнении. Он является комбинацией ИФА и электрофореза, что позволяет определить антитела к специфическим антигенам ВИЧ-1 (gp160, gp120, gp41).

ПЦР (полимеразная цепная реакция). Тест способен находить генетический материал ВИЧ (ДНК/РНК), то есть проверяет, есть ли непосредственно вирус в крови. Нуклеиновые кислоты могут обнаруживаться уже на 7-й день после инфицирования (по данным CDC — c 10 по 33 день).

Кроме того, ПЦР бывает качественным и количественным. В последнем случае можно отслеживать вирусную нагрузку (концентрацию вируса в крови и других биологических жидкостях) у людей с ВИЧ, оценивая эффект терапии.

А я могу сдать сразу иммуноблот или ПЦР, чтобы узнать свой ВИЧ-статус?

Иммуноблот используют специальные лаборатории центров по борьбе со СПИДом. Пробы крови направляются туда для перепроверки уже положительных первичных скрининговых анализов. Сразу сдать его не получится, даже в платных клиниках.

ПЦР, наоборот, можно сдать в любой момент, но только обратившись в коммерческую лабораторию. В СПИД-центрах его делают также для перепроверки ранее положительного теста. Да, ПЦР позволяет максимально быстро (в течение 7—10 дней после инфицирования) обнаружить ВИЧ, но и у него есть недостатки:

высокая стоимость;
может обнаружить только ВИЧ-1;
в редких случаях выявление низких уровней РНК ВИЧ (например, <1000 копий/мл) может привести к ложноположительному результату.

Этот тест имеет смысл делать если:

у человека есть подозрение на острую ВИЧ-инфекцию (высокий риск инфицирования) или в период серологического окна;
донорам крови;
новорожденным от ВИЧ-положительных матерей

Как тогда правильно проверяться на ВИЧ?

Согласно рекомендациям Минздрава, первоначальным анализом должен быть скрининговый тест ИФА. Если результат оказывается положительным, то в лаборатории, используя тот же образец крови, делают еще один анализ. Если и он «с плюсом», то тогда уже проводят иммуноблот.

Нужно ли повторно тестироваться, если результат анализа отрицательный?

Универсальной рекомендации, увы, нет. Повторные тесты нужны чтобы застраховаться от попадания в период окна, когда в крови еще нет антител и антигенов ВИЧ, а вирус уже проник в организм.

То же самое и с частотой тестирования — она зависит от разных факторов: количества рисков, приема доконтактной (PrEP) и постконтактной (PEP) профилактики, нахождения в группах риска (инъекционные наркопотребители, секс-работники, мужчины, практикующие секс с мужчинами). Однако эксперты рекомендуют проверяться каждые 6—12 месяцев.

Иммунный блоттинг при вич инфекции

Что может влиять на результат теста на ВИЧ?

Анализ на ВИЧ может дать неправильные результаты в следующих случаях:

при наличии системных аутоиммунных заболеваний (коллагенозов, васкулитов) и злокачественных опухолей;
при тестировании в период серологического окна — когда в крови еще не появились антитела к ВИЧ;
из-за ошибки при проведении теста в лаборатории;
после вакцинации от гриппа.

У детей, рожденных от ВИЧ-положительных матерей, до восемнадцатимесячного возраста в крови могут сохраняться материнские антитела, что может приводить к ложноположительным результатам.

Кроме того, прием PrEP и PEP могут влиять на точность анализов, так как антиретровирусные препараты уменьшают количество вируса в крови и антител к нему.

В случае с PEP после окончания курса рекомендуется посоветоваться с врачом и подобрать оптимальные сроки проведения анализов. Первый тест обычно проводят через 4—6 недель после контакта с ВИЧ, затем через 3 месяца, при необходимости — через 6 месяцев.

Считается, что крайне важно сдать анализ на ВИЧ перед началом приема PrEP и затем проверяться каждые 3 месяца, уже находясь на PrEP.

На результаты теста не влияют прием пищи и алкоголя или курение. Специальной подготовки перед сдачей анализов на ВИЧ не требуется.

А что с экспресс-тестами?

Они позволяют провериться на ВИЧ, не посещая лабораторию или поликлинику. По сути, это тесты ИФА третьего поколения, которые определяют антитела к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в слюне, моче или крови.

Их рекомендуют делать через три месяца после возможного риска инфицирования (чтобы избежать попадания в «окно»). Но считаются достоверными они с 30-го дня предполагаемого заражения (период появления антител).

Иммунный блоттинг при вич инфекции На рисунке показано, как быстро в крови появляются сам вирус (его генетический материал РНК) антитела и антигены, а также какие системы тестирования можно применить.

Точность большинства экспресс-тестов при хронической (длительно текущей) ВИЧ-инфекции достаточно высока (> 99 % чувствительности и специфичности), но все равно чуть ниже лабораторных анализов.

Сегодня среди них наиболее популярны тесты слюны (или околодесневой жидкости) и крови. Их можно либо купить самому, либо получить бесплатно в ВИЧ-сервисных организациях.

Важно помнить! Если такой тест оказался положительным, результат необходимо как можно быстрее перепроверить более точным методом.

Где я могу сделать тест на ВИЧ анонимно и бесплатно?

Можно пойти в местный СПИД-центр, кабинеты анонимного консультирования или в некоммерческие организации (например, фонд «СПИД.ЦЕНТР» Адрес: ул. Нижняя Сыромятническая д. 11 к 1, офис 313). Или в Центре-СПИД по Московской области (ул. Щепкина, 61/2, корп.8).

Анализ на ВИЧ бесплатный и анонимный, прикрепление к поликлинике и регистрация не требуются. После сдачи теста выдается идентификационный номер, по которому можно будет узнать результат.

Источник

Первые симптомы ВИЧ у женщин и мужчин на ранних стадиях

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) – одна из самых сложных и неизлечимых болезней в истории человечества. Благодаря современной медицине с данным заболеванием можно прожить довольно долго, но только в случае своевременной диагностики и лечения. Опасность заключается в том, что больной человек является носителем инфекции и может заражать здоровых людей. Поэтому так важно знать меры профилактики и основные симптомы ВИЧ, а также своевременно обращаться за помощью к врачам при наличии подозрений на инфицирование.

Первые случаи заражения были зафиксированы в 80-х годах в США у мужчин с нетрадиционной ориентацией. Согласно эпидемиологическим данным вирус берет свое начало из Африки. Сегодня он распространился по всей планете. Число новых случаев ВИЧ-инфекции за год составило около 2 млн. Смертность от вируса иммунодефицита человека снизилась на 51%.

Риск заражения:

в 12 раз выше у транссексуалов;
в 13 раз выше у представительниц секс-индустрии;
в 23 раза выше у потребителей инъекционных наркотиков;
в 27 раз выше у мужчин нетрадиционной сексуальной ориентации.

Основные признаки ВИЧ

Наиболее частыми признаками ВИЧ на ранней стадии у больных всех возрастов и полов являются увеличенные лимфоузлы до 2-6 см. Поражается не одна группа лимфатических узлов, а сразу несколько – чаще всего в горле, паху и подмышечных впадинах.

Распространенными и отчетливыми симптомами недавно приобретенной ВИЧ-инфекции являются лихорадка (примерно у 8 из 10 пострадавших) и характерная сыпь, о которой сообщает примерно каждый второй пациент. Около 45% недавно инфицированных имеют комбинацию этих двух основных симптомов.

Также очень распространены общая истощенность, потеря аппетита и боли в теле, после чего следуют мышечные боли, воспаление во рту и горле, а также заметная потеря веса. Различий между полами при этом нет. Признаки ВИЧ у женщин и мужчин на ранних стадиях неспецифичны и являются характерными для других заболеваний.

Виды вируса иммунодефицита человека

На протяжении всего периода изучения этого заболевания и поиска эффективного средства для его лечения неоднократно менялась классификация стадий ВИЧ-инфекции.

Сегодня выделено 5 стадий:

Инкубационный период – время заболевания, от начала проникновения инфекции до момента выработки антител и/или появления характерных симптомов. Продолжительность периода зависит от иммунитета и составляет от 2 недель до 3 месяцев.
Стадией первичных проявлений является период внедрения, развития и распространения ВИЧ по всему организму больного. Продолжительность стадии от 2 недель до 1-2 месяцев.
Латентная (субклиническая) стадия – период бессимптомной борьбы иммунитета с вирусом. Эта фаза длится от 2 до 10-20 лет.
Стадия последующих заболеваний (преСПИД) – время, когда иммунная система значительно подорвана и разрушена и не имеет достаточно сил, чтобы справиться с инфекцией.
Терминальная стадия – характеризуется необратимыми процессами в организме человека. Результат этого периода –смерть.

Читайте также: Как эмигрировать с вич

Признаки острой стадии ВИЧ тесно связаны с развитием таких заболеваний, как ангина, пневмония, герпес, грибковое поражение кожи или слизистых, псориаз и дерматит. Латентная стадия характеризуется постепенным угнетением иммунной системы. В этот период у больных не наблюдается никаких патологий и проявлений. Идентификация ВИЧ на этом этапе возможна только путем обнаружения в крови антител к вирусу.

При латентной стадии ВИЧ-инфекции может развиться множество заболеваний:

грибковые и вирусные заболевания;
бактериальные инфекции;
опоясывающий лишай;
волосатая лейкоплакия;
туберкулез;
саркома Капоши.

Часто наблюдаются фарингиты и синуситы. Многие больные ВИЧ сталкиваются с лихорадкой и длительной диареей.

Симптомы ВИЧ-инфекции

ВИЧ на ранних стадиях у женщин имеет некоторые специфичные симптомы. Характерны обильные выделения из влагалища белого цвета, боль при мочеиспускании и во время полового акта. Симптомы ВИЧ у женщин на ранних стадиях также включают нарушения менструального цикла и дискомфорт внизу живота.

Ранние стадии ВИЧ у мужчин проявляются длительно незаживающими ранами и порезами на теле. Все воспалительные процессы протекают тяжело (бронхиты, фарингиты и пр.). Симптомы ВИЧ на ранних стадиях у мужчин также включают апатию и отрешенность от повседневной жизни. На коже появляются папулы, которые имеют гнойное содержимое.

Симптомы ВИЧ на ранних стадиях, характерные для обоих полов, похожи на проявления традиционных инфекционных заболеваний:

лимфаденопатия;
усталость;
озноб;
боль в горле;
головная боль;
сильное потоотделение во время сна;
мышечная боль;
сыпь на теле и на слизистых оболочках;
диарея, тошнота, рвота;
увеличение печени и селезенки;
потеря веса.

Если ВИЧ-инфицированная или больная СПИДом женщина забеременеет, ребенок рискует заразиться. Однако риск составляет менее 1%, если мать во время беременности принимает лекарства от ВИЧ, если было выполнено кесарево сечение или новорожденный получает химиотерапевтическую профилактику. Без этих мер вероятность заражения для ребенка составляет от 15 до 20%.

Дети инфицированных женщин также могут заразиться при грудном вскармливании. С помощью профилактических мер риск передачи может быть снижен примерно с 30% до 5%.

У многих детей признаки заболевания могут не ощущаться до 6-7, а иногда даже до 10-12 лет. Признаки ВИЧ включают задержку в физическом развитии, психомоторное недоразвитие, лимфаденопатию, увеличение печени и селезенки (миалгия). Дети часто сталкиваются с ОРЗ, проблемами со стороны ЖКТ. Отмечается сыпь, нарушение кровообращения, анемия и энцефалопатия.

Как передается ВИЧ

Вирус, который вызывает ВИЧ-инфекцию, передается через:

незащищенный половой акт;
кровь зараженного человека;
загрязненные медицинские приборы.

Использование презервативов является лучшей защитой от ВИЧ-инфекции. Передача возможна через вагинальный, анальный и оральный половой акт. Вирус обнаруживается в сперме и вагинальной жидкости инфицированных.

Возможные осложнения

Смерть больных ВИЧ наступает либо вследствие прогрессирования вторичных болезней, либо других сопутствующих заболеваний, не связанных с ВИЧ.
Основные причины смерти больных СПИДом:

генерализованный туберкулез;
легочная патология (с последующим развитием дыхательной недостаточности);
цитомегаловирусная инфекция;
цирроз печени вследствие развития вирусного гепатита C на фоне хронического алкогольного отравления.

Прогрессирование хронического цирроза, гепатита B у таких больных происходит в течение 2-3 лет.

Постановка диагноза

Диагностика ранней стадии ВИЧ-инфекции осложняется тем, что первые симптомы не являются характерными непосредственно для ВИЧ-инфекции.
На начальных стадиях заболевания антитела к ВИЧ обычно не обнаруживаются, поэтому основным диагностическим методом являются:

ПЦР (полимеразная цепная реакция) – метод обнаружения РНК вируса.
ELISA (иммуноферментный анализ) для определения антител к ВИЧ, которые обычно обнаруживаются через 3 месяца после заражения.
Иммуноблоттинг (метод применяется после положительного результата ELISA). Суть заключается в определении специфических антител к 3 основным антигенам вирусной оболочки.

После получения результатов проведенной диагностики рекомендуется проконсультироваться со специалистом по инфекционным заболеваниям.

Принципы лечения

После острой стадии ВИЧ-инфекции следует интервал без явных проявлений, который обычно может длиться от нескольких месяцев до нескольких лет. На этом этапе иммунной системе удается держать возбудителей ВИЧ под контролем. Благодаря антиретровирусным препаратам сегодня удается продлить эту фазу.

Пациенты с ВИЧ получают высокоактивную антиретровирусную терапию (BAAPT). Она состоит из индивидуально адаптированной комбинации различных препаратов. Существует более 20 лекарств, используемых для лечения ВИЧ. Важно правильное сочетание медикаментов для предотвращения развития резистентности вируса HI.

Доступны следующие лекарства:

Ингибиторы обратной транскриптазы (RTI): препятствуют размножению вируса, ингибируя фермент «обратная транскриптаза», необходимый для этого. Примеры активных веществ: ламивудин, тенофовир, эмтрицитабин, эфавиренз.
Ингибиторы протеазы (PI): предотвращают размножение вируса, ингибируя повторный состав вирусных частиц. Одним из таких действующих компонентов является атазанавир.
Ингибиторы интегразы (INI): не позволяют вирусу вставлять свою наследственную информацию в человеческий наследственный материал клетки-хозяина, препятствуя возникновению новых вирусов.
Ингибиторы слияния (FI): препятствуют вирусу проникать в клетку человека. К ним относится энфувиртид.

Меры профилактики

Защитить себя от ВИЧ-инфекции относительно просто. Следует соблюдать осторожность, избегая контакта с потенциально инфицированными людьми.

Для собственной безопасности:

откажитесь от незащищенного полового акта;
используйте только стерильные инструменты для различных медицинских и косметологических манипуляций;
проходите тесты на ВИЧ не реже одного раза в год;
обязательны тесты на ВИЧ при планировании и во время беременности,

Если инфицирования избежать не удалось, тогда для снижения вероятности передачи вируса необходимо принимать специальные лекарственные средства.

Если результаты теста положительны, необходимо:

обратиться в Центр по профилактике и борьбе со СПИДом;
получить подробную информацию о состоянии своего здоровья, жизни с ВИЧ, правах и обязанностях.

В основе всех профилактических мер лежит просвещение населения – особенно групп риска: наркоманов и гомосексуалистов. Профилактика сегодня является важной общественно-политической задачей. Помимо государственных, существует множество неправительственных организаций, которые активно участвуют в программе борьбы с опасной инфекцией.

Литература:
https://cyberleninka.ru/article/n/aktualnye-voprosy-kultury-zdorovya-vich-infektsii-i-spid/viewer
https://www.lvrach.ru/2019/09/15437388
https://www.eurolab.ua/encyclopedia/565/44418
https://congress-ph.ru/common/htdocs/upload/fm/vich/16/tezis.pdf

Источник