Как проверяют кровь донора на гепатит

Содержание статьи

Забота о здоровье

Доноров крови будут тщательней проверять на наличие инфекций. Так, отказать навсегда в донации организация службы крови сможет на основании не только положительного, но повторного сомнительного результата анализа крови, а попасть снова в ряды доноров после временного отвода в большинстве случаев разрешат лишь через четыре месяца.

Соответствующие требования включены в новые правила проведения медобследования доноров крови для допуска к донации, разработанные минздравом. Документ размещен для обсуждения на федеральном портале проектов нормативных правовых актов.

Основное новшество в том, что теперь донорскую кровь будут проверять на антитела к ядерному антигену вируса гепатита В (анти-НВс). Как пояснили в минздраве, это связано с распространением скрытой формы течения болезни, которая очень сложно диагностируется. Раньше при обследовании выявляли лишь поверхностный антиген гепатита B. Это действительно главный маркер острой или хронической инфекции, но он не всегда позволяет определить ее в латентном состоянии. Новое требование исключит любую возможность заражения реципиентов гепатитом B.

По новым правилам в случае сомнительных анализов на наличие инфекции донору будет сделан отвод на 120 дней, после чего его пригласят на новое обследование. Однако при повторном тестировании исследуемый образец крови при неопределенном результате будет считаться положительным, а отвод от донорства крови и ее компонентов будет уже постоянным.

«Установление клинического диагноза донору не входит в задачи службы крови», в то же время она «несет ответственность за качество и безопасность заготовленной крови и ее компонентов для здоровья реципиента», поэтому «для принятия решения не существует принципиальной разности, присутствует в организме донора вирус или реактивность сыворотки связана с неспецифической реакцией, обусловленной какой-либо иной патологией органов», говорится в пояснительной записке к проекту документа.

Поводом для отказа в донации теперь могут стать возраст младше 20 лет и масса тела меньше 70 килограммов, раньше потенциальному донору достаточно было быть совершеннолетним и весить от 50 килограммов.

Абсолютными противопоказаниями остаются такие серьезные заболевания, как ВИЧ, сифилис, туберкулез, все вирусные гепатиты, онкология, болезни крови. В доноры не возьмут при наличии психических расстройств, инвалидности I и II группы. Запрещено сдавать кровь при низком или высоком артериальном давлении, слабом пульсе, температуре выше 37 градусов, беременности, в течение 10-30 дней после вакцинации (зависит от прививки), при заболеваниях почек, обострении гастрита или язве желудка, в период приема антибиотиков. Также донация исключена в течение 120 дней после некоторых косметических процедур: пирсинга, тату, иглоукалывания. Ограничено ее ежегодное количество: например, сейчас мужчины могут сдать кровь не более пяти раз в течение 12 месяцев, а женщины — не более четырех. При этом объем плазмы, заготовленной от донора за один календарный год, не может быть более 20 литров, а донации двух и более компонентов крови за одну процедуру не должны превышать 750 милилитров. Анкеты доноров должны будут храниться в организации службы крови в течение пяти лет.

Поводом для отказа в донации могут стать возраст младше 20 лет и масса тела меньше 70 килограммов. В случае сомнительных анализов на наличие инфекции донору сделают отвод на 120 дней

Как рассказали в минздраве, в России число доноров увеличивается ежегодно и сейчас составляет около двух миллионов человек, получается, что на каждые 1000 человек приходится 14-15 доноров. Однако, по данным ВОЗ, для удовлетворения потребности в крови их должно быть втрое больше, поскольку ежедневно переливание крови необходимо более чем 1,5 миллиона человек.

Число почетных доноров также растет. Чтобы попасть в их ряды, необходимо сдать кровь безвозмездно 40 раз либо 60 раз сдать кровь с компонентами. После этого донор заполняет заявление на станции переливания и через несколько месяцев получает главные документы: удостоверение и значок.

Сегодня почетным донорам полагается ежегодная денежная выплата в размере около 15 тысяч рублей, а также льготы, которые могут отличаться в регионах. Все доноры по закону получают два дополнительных выходных: один с сохранением средней зарплаты в день кроводачи, второй — день отдыха. Эти дни можно использовать сразу, а можно перенести на любой другой день в течение года или присоединить к отпуску.

Источник

Опыт использования метода ПЦР для выявления РНК (ДНК) возбудителей вирусных гепатитов В и С у серонегативных доноров

О.А. Тарасенко, И.А. Гукасян, Л.В.Соболевская, Т.В. Черненко

Станция переливания крови Департамента Здравоохранения г. Москвы

В настоящее время исследование образцов донорской крови на маркеры вирусных гепатитов В (ВГВ) и С (ВГС) проводят серологическими методами: иммуноферментным (ИФА) или иммунохемилюминисцентным (ИХЛА) анализом, позволяющими определять наличие в них поверхностного антигена ВГВ (HBsAg) и антител к белкам ВГС (анти HCV). Введение в лабораторную практику службы крови обязательного тестирования донорской крови на указанные серологические маркеры ВГВ и ВГС позволило значительно снизить риск посттрансфузионной передачи ВГС и ВГВ.

Известно, однако, что при ВГС специфические антитела появляются в среднем через 10-12 недель от момента заражения, а в некоторых случаях сроки их появления могут отодвигаться до 30-50 недель [2,6]. Поэтому при исследовании методами ИФА или ИХЛА образцов крови, взятой от донора с ранней стадией ВГС, когда антитела еще не выявляются (период, так называемого, серонегативного окна), получают, как правило, ложноотрицательный результат. В то же время именно в этот период ВГС наблюдается, выраженная виремия и связанная с ней высокая « инфекционная способность» инфицированной крови [3 ]. В связи с этим компоненты крови, заготовленные от донора, находящегося в периоде «серонегативного окна», являются основным источником заражения реципиента ВГС при гемотрансфузии.

Использование NAT-технологий, в частности метода ПЦР, позволяет выявить РНК HCV в крови уже через 1-2 недели после заражения, т.е. приблизительно за 60 дней до выявления в ней антител к HCV серологическими тестами.

HBsAg в большинстве случаев является наиболее значимым серологическим маркером острого и хронического ВГВ, выявление которого в крови свидетельствует с высокой степенью вероятности о присутствии в ней вируса . Однако, зарегистрированы случаи заражения ВГВ при переливании HBsAg-негативной крови. В настоящее время известно о существовании по крайней мере двух «ускользающих (escape)» мутантов HBsAg [9,13], которые могут возникать как естественным путем в ходе инфекционного процесса, так и после противовирусной терапии. Эти штаммы HBV способны передаваться горизонтальным путем и обусловливать ложно негативный результат при скрининге донорской крови на HBsAg. Описана, так называемая, «молчащая» форма ВГВ, характеризующаяся наличием низких концентраций вируса в крови при не детектируемом уровне HBsAg [2, 11]. Она может наблюдаться у некоторых больных после острого ВГВ с самостоятельным разрешением и даже после успешно проведенного противовирусного лечения, а также при хроническом ВГВ. Установлено, что «молчащая» инфекция представляет клиническую форму ВГВ, способную передаваться через компоненты крови, а диагностика ее основывается на тщательном сборе анамнеза и применении высокочувствительного метода ПЦР для определения вирусной ДНК [1].

Задачей настоящей работы было оценить целесообразность использования метода ПЦР для скрининга донорской крови на маркеры ВГС ВГВ.

Пробы крови от каждого донора забирали в 2 пробирки: одну пробирку с разделительным гелем для получения сыворотки для серологических исследований и вторую пробирку с ЭДТА для получения плазмы для ПЦР.

Скрининг донорских сывороток на серологические маркеры ВИЧ 1,2, ВГВ и ВГС проводили методом ИФА на аппарате Evolis (компания Biorad, США) или методом ИХЛА на аппарате Architect (компания Abott, США).

Для определения антител к HCV методами ИФА и ИХЛА использовали, соответственно, тест-системы Murex anti HCV (Abbott, США) и тест-системы Architect anti HCV (компания Abbott, США).

Для выявления HBsAg методом ИФА использовали тест-системы Monolisa HBsAg Ultra (Bio-Rad, США) и тест-системы Architect HBsAg (компания Abbott, США).

Образцы, показавшие при первичном исследовании в ИФА или ИХЛА положительный результат на анти ВИЧ 1,2, анти HCV или HBsAg, отбирали для повторного исследования в тех же тест-системах и подтверждающих тестах.

Все серонегативные образцы исследовали методом ПЦР на наличие РНК HIV, HCV и ДНК HBV.

В течение 2008 года ПЦР-исследования проводили на аппаратах Cobas Ampliprep/ Cobas Amplicor ( компания Roch, Швейцария) с использованием тест-систем: Cobas Ampliprep/Cobas Amplicor HIV 1 Monitor Test , Cobas Ampliprep/ Cobas Amplicor HCV Test и Cobas Amplicor HBV Monitor Test.

С января 2009 года исследования выполняли методом ПЦР в режиме реального времени на инструментальном комплексе Cobas 201 (Roche. Швейцария), включающем пипетирующую рабочую станцию, аппарат для автоматического выделения нуклеиновых кислот Cobas Ampliprep и анализатор Cobas Taqman для автоматического проведения амплификации и детектирования нуклеиновых кислот с использованием 5 нуклеазной технологии. Многоканальные оптические системы прибора позволяют регистрировать флуоресцентный сигнал от исследуемого образца в каждом цикле ПЦР. Для ПЦР-анализа серонегативных образцов использовали мультиплексные тест-системы CobasTaqScreen MPX Test, разработанные компанией Roche специально для скрининга донорской крови [10]. За счет включения в реакционную смесь различных пар специфических праймеров и зондов эти системы позволяют выявлять одновременно в одной пробирке РНК HIV-1 rpyппы М и группы О, HIV-2, HCV и ДНК HBV. Образцы, при исследовании которых регистрировали нарастание флуоресцентного сигнала, считали положительными, т.е. содержащими вирусную РНК (ДНК). Такие образцы исследовали повторно в той же тест-системе. При получении повторно положительного результата проводили идентификацию выявленной нуклеиновой кислоты с помощью указанных выше ПЦР-диагностикумов на отдельные инфекции.

Результаты исследования представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1 — Результаты исследования серонегативных образцов донорской крови методом ПЦР на комплексе Cobas Ampliprep/Cobas Amplicor

Количество исследований	Количество образцов, содержащих:
PHKHCV	РНК HIV	ДНК HBV
56 983	8

Таблица 2 — Результаты исследования серонегативных образцов донорской крови методом ПЦР на комплексе Cobas S 201

Количество исследований	Количество положительных результатов в тесте МРХ	Количество положительных результатов в дискриминаторном тесте на:
		РНК HCV	РНК HIV	ДНК HBV
62 438	31	16	4

При исследовании 56983 серонегативных образцов донорской плазмы на наличие вирусной РНК (ДНК) на аппаратах Cobas Ampliprep/Cobas Amplicor с помощью диагностических тест-систем на отдельные иифекции (табл.1) было выявлено 8 образцов, содержащих РНК HCV. При этом РНК HIV-1 и ДНК HBV ни в одном из исследованных образцов выявлено не было.

При исследовании 62438 серонегативных образцов на аппаратном комплексе Cobas 201 с помощью тест-систем Cobascreen МРХ в 31 случае было зарегистрировано нарастание флуоресцентного сигнала, свидетельствующее о наличии в образце вирусной РНК (ДНК) (табл.2). Дискриминаторный анализ этих образцов с помощью тест- систем на отдельные инфекции выявил в 16-и из них РНК HCV, в 4-х. других- ДНК HBV в низкой концентрации (менее 60 IU./ml). Остальные 11 образцов, положительные в тесте Cobascreen МРХ, показали отрицательный результат в индивидуальных тестах на РНК HIV-1, РНК HCV и ДНК HBV. Однако при исследовании образцов, содержащих ДНК HBV и образцов с не идентифицированной нуклеиновой кислотой на наличие антиНВсоr во всех случаях выявили выраженную серологическую реакцию (коэффициент позитивности колебался от 7,8 до 8,6) (табл.3).

Читайте также: У жены гепатит с

Таблица 3 — Выявление ДНК HBV у серонегативных доноров

№ п/п	Результат скринингового теста	Результат ПЦР-теста на ДНК HBV	Наличие Anti НВсог	Наличие Anti HBs
1	+	—	+	—
2	+	+	+	—
3	+	—	+	—
4	+	—	+	+
5	+	+	+	—
6	+	—	+
7	+	—	+	—
8	+	+	+	—
9	+	—	+	+
10	+	—	+	—
11	+	+	+	_
12	+	—	+	+
13	+	—	+	—
14	+	—	+	+
15	+	—	—	—

В 4-х образцах были также обнаружены антитела к HBsAg . Наличие в образцах с не идентифицированной нуклеиновой кислотой серологических маркеров HBV инфекции позволяет считать, что в них присутствует ДНК HBV в концентрации ниже предела чувствительности теста Cobas Amplicor HBV Monitor (40 IU/ml), выявляемая, однако, более чувствительной тест-системой Cobascreen MPX (3,3-4,4 IU/ml).

Обобщая полученные результаты, мы установили, что методом ПЦР из 119421 образцов донорской плазмы, показавших отрицательный результат в серологических тестах, выявлено 24 образца (0,02%), содержащих РНК HCV. 16 HCV -позитивных образцов имели нормальный уровень трансаминаз, в то время как в 8-и других был зарегистрирован повышенный уровень активности АЛТ. Подобная картина может наблюдаться как при ранней инфекции (период серонегативного окна), так и при хроническом ВГС у лиц с подавленным иммунитетом. Данные литературы, свидетельствующие об отсутствии прямой зависимости между уровнем АЛТ и наличием РНК HCV в сыворотке крови [4] позволяют считать, что обнаружение РНК HCV в крови является наиболее информативным показателем HCV-инфекции в период серонегативного окна.

Также нами было выявлено 11 случаев ВГВ у HBsAg негативных доноров. В 4-х из них низкий уровень виремии сохранялся несмотря на наличие анти- HBS. Известно, что подобное состояние иногда может наблюдаться длительное время после клинического выздоровления от острого ВГВ. Предполагают, что персистенция вируса в этом: случае может осуществляться в форме иммунного комплекса с анти-HBs [11]. В остальных случаях сочетание низкого уровня виремии с наличием только анти-НВсог скорее укладывается в картину «молчащей» формы хронического ГВ. Считают, что отрицательные результаты при детекции HBsAg у больных ВГВ могут быть вызваны низким уровнем HBsAg, образованием иммунных комплексов, а также мутациями вируса в S-регионе [11,17]. Механизмы, поддерживающие низкий уровень репликации вируса при «молчащей» форме ГВ нуждаются в дальнейшем изучении. В настоящее время к факторам, способным поддерживать персистенцию вируса в крови при «молчащей» HBV- инфекции относят инфицирование вирусом моноцитов крови, формирование иммунных комплексов с антителами, ослабленный иммунитет и коинфекцию [11,17].

Таким образом, на основании полученных результатов можно заключить, что скрининг образцов донорской крови с применением ПЦР-тестирования для выявления вирусной РНК (ДНК) позволит снизить риск посттрансфузионной передачи вирусных гепатитов В и С, за счет выявления инфицированных доноров, находящихся в периоде серонегативного окна и доноров с молчащей формой инфекции. Алгоритм апробации донорской крови, при котором скрининг образцов методом ПЦР проводят одновременно с исследованием их в серологических тестах, позволит не только повысить инфекционную безопасность гемопродукции, но и сократить промежуток времени от момента забора крови до выдачи ее в лечебные учреждения, что особенно важно для сохранения компонентов с ограниченным сроком годности.

ЛИТЕРАТУРА

1. Амосов А.Д. Гепатит В (издание 2). Кольцов, 2001.- 128 с.

2. Голосова Т..В., Никитин И.К. Гемотрансмиссивные инфекции.- М.., 2003.- 191 с.

3. Карякин А.В., Скоцеляс Е.Д., Терентьева Л.А. Мониторинг безопасности донорского контингента России//Трансфузиология, 2007.- №1-2.- с.21.

4. Майер К.П. Острый вирусный гепатит С.// В кн.: Гепатит и последствия гепатита. /Пер. с нем.- М.: ГЭОТАР Медицина,. 1999.- с.91-98.

5. Малышев B.C., Федорова В.Д., Потехин О.Е. Маркеры вирусного гепатита В у доноров крови и в группах сравнения // Иммунопатология, аллергология, инфектология.-1999.- №1.- с.103-105.

6. Рагимов А.А., Дашкова Н.Г. Основы трансфузионной иммунологии. — М., 2004.-280 с.

7. Allain J.P. Occult hepatitis В virus infection: implication in transfusion. // Vox Sang., 2004, Vol.86, N.2, p.83-91.

8. Busch M.P., Glynn S.A.. Strainer S.L. et al. A new strategy for estimating risk of transfusion-transmitted viral infections based on rates of detection of resently infected donors.// Transfusion, 2004, vol. 45, p.254-264.

9. Gutierrez C, Devesa M., Loureiro C.L. et al. Molecular and serological evaluation of surface antigen negative hepatitis В virus infection in blood from Venezuela. // J.Med.Virol., 2004, Vol. 3, N.2 p.200-207.

10. Herman S., Ohhashi Y., Kyger E. et al. Performance characteristics of a new multiplex NAT screening test for HBV, HCV and HIV. The Cobas creen MRX Test on the COBAS S 201 system.// Vox Sang., 2007, Vol.91, Suppl.3:81.

11. Ke-Qin Hu. Occult hepatitis В virus infection and its clinical implications. // Journal of viral hepatitis, 2002, Vol.9, p.243-257.

12. Kleinman SH., Strong DM., Tegtmeier GE. Et.al. Hepatitis В virus (DBV) DNA screening of blood donation in minipools with the Cobas AnipliScreen HBV test. // Transfusion, 2005.VoI.45, p.1247-1257.

13. Levicnik.-Stezinar S. Hepatitis В surface antigen escape mutant in a first blood donor potentially missed by a routine screening assay. // Clin.Lab.< 2004, Vol.50, N.l-2, p.49-51.

14. Minegishi K., Yoshikawa A., Kishimoto S. et al. Superiority of minipool nucleic acid amplifycation technology for hepatitis В virus over chemiluminescence immimoassay for hepatitis В surface antigen screening. Vox Sang., 2003, Vol.84, p.287-291.

15. Roth W.K., Weber M., Petersen D. et al. NAT for HBV and anti HBc testing increase blood safety. // Transition, 2002, Vol.42, p.869-875.

16. Stramer S.L., Glynn S.A., Kleinman S.H. et al. Detection of HTV-1 and HCV infections among antibody-negative blood donors by nucleic acid- amplification testing.// N Engl Med, 2004, vol.351, p.760-768.

17. Weber В., Melchior W., Gehrke R. et al. Hepatitis В virus markers in anti-ITBc only positive individuals. III. Med. Virol., 2001, Vol.64, N.3, p.312-3 19.

18. Yoshikawa A, Gotanda Y., Itabashi M. et al. Hepatitis В NAT virus-poselive blood donors in the esrly and late stages of HBV infection: analyses of the window period and kmetics of HBV DNA. Vox Sang.,2005, Vol.88, p.77-86.

19. Голосова Т.В., Никитин И.К. Гемотрансмиссивные инфекции. — М.,2003.

Все статьи в разделе «Лабораторная диагностика»

Источник

28 2020. 1166 » ( ) () , , () » ( )

— 28 2020. 1166 » ( ) () , , () » ( )

28 2020. 1166 » ( ) () , , () » ( )

1 2 9 20 2012. 125- » » ( 2012, 30, .4176), 20 , , , 22 2019. 797 ( , 2019, 27, .3574), :

1. :

, 1;

( ) () , , () , 2.

2. 1 2021. 1 2027.

26 2020.

61104

1. () ( — , ) ( — ), ( ) () ( — ), , , () .

2. , , () ( — ) 1 15 20 2012. 125- » «1.

3. 2 .

4. , 20 21 2011. 323- » «3 ( — 323-) 4, .

5. , , , 5 ( — ) , :

( — ) ( 1 ;

( — ) ( 2 );

( 3 ).

, , .

6. , .

7. , .

8. , , .

9. , , :

) ( ) () , ;

) , .

10. — :

1) , ( , );

2) , , , , , , , , 8 4 13 323-6;

3) ( , , , , , , );

4) ( ):

( );

0, , 1 Kell ( — ) ( );

5) , :

;

6) , , , , , D, , .

11. 4 .

12. ( ) , .

13. , : , , , , ( ), .

14. () — , () ( 5 ).

15. — 2 , 6 , ( ) 7 16 .

16. :

) :

, , — , , (, );

, , , 2- — , , (, );

) ( ):

— , , , , ;

, , , — , , (, ).

, , 0, -, , , , , , .

17. () () ( — ) , 1 2 .

18. () () ( ) ( — ) () , 2 2 .

19. , () , — () .

20. () () () .

21. , , — , , .

, , , .

22. , 2 , .

23. , .

24. () , , , , () , () , () -.

25. , , 5 .

——————————

1 , 2012, 30, .4176.

2 78 21 2011. 323- » » ( , 2011, 48, .6724; 2017, 31, .4791) ( — 323-).

3 , 2011, 48, .6724; 2019, 10, .888.

4 27 2006. 152- » » ( , 2006, 31, .3451; 2020, 17, .2701).

5 20 20 2012. 125- » » ( , 2012, 30, .4176; 2018, 1, .41) ( — 125-).

6 , 2011, 48, .6724; 2020, 14, .2023.

——————————

28 2020. 1166

()

, , ( ) ()

_________________________________________________________________________

(, , ) () _____

_________________________________________________________________________

__________________________________________

(, , )___________________________________

__________________________

28 2020. 1166

()

________________________________________________________________________

(, , ( )

_________________________________________________________________________

( , )

()

_________________________________________________________________________

( )

___________________________________________________

(, , , ( )

)

, , () , , .

() . () , , () . , , — , () () . , () -, , .

(), () ( , ), .

() , — 121 122 .

___________________ ___________________________________________________

() (, , ( ) )

___________________ ___________________________________________________

() (, , ( )

)

28 2020. 1166

,

,______________________________________________________________________,

(, , ( ))

________________, _____________, _____________.

_________________________________________________________________________

() :______________________________________________

9 27.07.2006

152- » «, ___________________________

(

)

( — ) :_____________________, , : , , ( ); ; ; (); (, , ); ; (, , ); ( , ).

() , , , , , , , , , , . , , , : 20.07.2012 125- » «.

____________________

_________________________

28 2020. 1166

1. 0, -, 1 Kell ( — ), , , , , D, , , , — , , , .

2. , ( ).

3. .

4. +2 +24 .

5. , , () , ( )1.

6. () () ( — , ).

7. :

) 0:

, 1, . 0;

«» «» ( 1, , 0);

( -1), , -1;

-1 ;

) — D, , ;

— D D;

, , -D IgM , , -D IgG , , D;

, D , (D)-.

) , , , , D, .

8. , . 3 , () . .

9. «» «» ( , ).

10. , , , 180 .

11. . ( ).

12. , , , , .

13. 1 2 , — , , 27 2012. 1416 » «;

() () 24 (), , , . . ;

— , ;

— 6 .

14. : — 10 000 / , — 5 000 / , — 100 /. () , , .

15. , , .

, , , .

, , , () .

16. , . .

120 , .

17. , , .

18. ( — -).

— .

— 120 , .

19. 120 , .

20. 16, 18 19 , 120 , -, , .

120 . .

120 , .

21. — , , .

— , , .

22. — , , .

( — ) . .

23. — , . , .

, , , , .

24. , , , , , , -. — — , .

25. — , — , . .

26. , , .

27. , , () , , .

——————————

1 4 , 27 2012. 1416 ( 2013, 1, .14).

——————————

28 2020. 1166

, ()

1. — , ( 7 ) () , :

1) :

;

, ;

;

2) () , :

— 450 50 () 5 , 4 ;

— 10/ , 750 ();

, ( ) — 200 ()

2 , ( ) — 400 () 2 ;

, : ;

, : 3 .

2. , — 16 ( , ).

3. 5, 4 .

4. , 750 ( 400 , 700 ), .

28 2020. 1166

( ) () , , ()

1. () , , ()

2. ()

1. : , (-), , , , ( ), , , , ( ), , , , , , , , , , , (-), , .

2. .

3. , , .

4. ( ).

5. () , () .

6. () .

7. , .

8. ( () II-III , , , , , , , (, )).

9. ( , , ).

10. ( , , , , , ).

11. ( , ).

12. , () .

13. .

14. .

15. (, , , , , 6 ).

16. (, , , , , (), , ).

17. (, , (, , , , )), , (I II ), .

18. (I II ).

19. 2 , .

20. , .

21. ( ).

22. -1 ( ).

2021. . » «. , , .

() , , .

1 2021. 1 2027.

Источник