Мазок пцр на вич что такое
Содержание статьи
ПЦР на ВИЧ
Возможность записаться к врачу как мужского так и женского пола на выбор
Уникальная авторская 100% БЕЗБОЛЕЗНЕННАЯ методика забора мазков у мужчин
300 метров от метро Кропоткинская
БЕЗ ВЫХОДНЫХ с 09:00 до 20:00
Результаты анализов за 20 минут (мазок и кровь на ЗППП) стоимость 500 рублей на 1 инфекцию
Врачи высшей категории, кмн с опытом работы от 15 лет — консультация 900 рублей
Анонимность анализов и лечения
Записаться на прием
Полимеразная цепная реакция, или ПЦР.
Метод определения в пробах материалов, подвергающихся исследованию, любых ДНК и РНК, в случае неэффективности других методов.
Суть этого метода звучит в самом названии.
Поначалу исторический экскурс.
Автор разработки Кэри Мюллис, заработал Нобелевскую премию за работу 1983 года.
Первоначально планировалось научное применение метода, но впоследствии он завоевал свое место и в диагностической медицине.
Этим методом можно определять генетический материал всевозможных инфекций.
Гинекологические и урологические труднодиагностируемые инфекции выявляются этим методом.
Очень часто ПЦР используется для диагностики ВИЧ.
Основы метода, на основании которых работает исследование, основаны на уникальности фрагмента ДНК для каждой инфекции.
В случае с ВИЧ это РНК.
Руководствуясь принципом комплементарности, эталонный участок ДНК или РНК делает обнаружение «своего» фрагмента.
И создает большое количество копий этого фрагмента ДНК (или РНК).
Геометрическая прогрессия определяет число копий в течение цикла ПЦР (около 3-х минут).
По прошествии нескольких часов число фрагментов — несколько миллиардов.
Теперь несложно определить и возбудителя инфекции.
Метод силен своей универсальностью.
Для определения фрагментов ДНК (или РНК) возбудителя любой инфекции всегда используется одно и то же стандартное оборудование.
ПЦР славится и своей специфичностью (практически 100%).
Можно использовать один и тот же исследуемый материал для поиска разных возбудителей заболеваний.
У метода очень высокая чувствительность и оперативность.
Всего в течение дня, можно узнать, есть ли возбудитель в организме и какой.
Инкубационный период не мешает проведению исследования.
Нет еще клиники заболевания и антител в крови, но есть ДНК или РНК конкретного возбудителя в организме подвергающегося исследованию.
К недостаткам метода нужно отнести высокую квалификацию врача, берущего материал для исследования, и лаборанта, проводящего исследование.
Также важна высокая чистота помещения, в котором проводят исследование (практически 100%), чтобы результаты исследований были достоверными.
Для ИППП существуют специальные комплексные исследования, при которых определяют наличие сразу нескольких возбудителей.
А теперь поговорим о перспективах ПЦР для диагностики ВИЧ-инфекции.
Когда делают ПЦР на ВИЧ
От четырех до четырнадцати дней спустя, после инфицирования, можно обнаружить ВИЧ данным методом.
Достоверность результата оценивают, когда минуло четырнадцать дней спустя опасной половой связи.
Наличие отрицательного результата говорит о достоверности проведенного исследования.
Но для того чтобы получить непререкаемый результат исследования проводят еще и ИФА.
ПЦР является высокочувствительным методом, в основе которого лежит амплификация (усиление) небольшого участка провирусной ДНК (или РНК) за счёт праймеров.
Праймеры — это специальные реагенты.
Желательная (не обязательная) процедура взятия венозной крови на исследование на ВИЧ-инфекцию.
Проведение ПЦР для диагностики достаточно дорогостоящий анализ.
Его делают не всегда, а в особых случаях.
Например, донорам.
И если случилась медицинская авария, в которой есть ВИЧ-инфицированные и возможно заразившиеся.
Спустя четырнадцать дней достоверность на наличие ВИЧ-инфекции порядка 98%.
По истечении пяти дней после предполагаемого заражения — 80%.
Анализ ИФА можно делать только тогда, когда появятся антитела к ВИЧ в крови.
Проходит от одного до трёх месяцев, иногда до года.
Поэтому если есть озабоченность по поводу ВИЧ инфицирования, лучше не тянуть, а сделать этот дорогостоящий, но такой необходимый анализ.
Важно знать диагноз как можно раньше.
Поставьте оценку статье:
Как делают
Нахождение ВИЧ в пробах крови методом ПЦР выполняется двумя вариантами:
- исследуется провирус ВИЧ-инфекции, точнее его ДНК
- исследуется плазма или сыворотка крови на РНК ВИЧ-инфекции
Периферическая кровь, точнее ее мононуклеарные клетки, исследуются на содержание провируса.
По причине того, что ИФА дает вероятность выше 98% — 99,9%, ПЦР не является 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции.
Большой процент ложноположительных срабатываний зависит и от чистоты лаборатории, где проводят исследования, и от квалификации проводящего исследования.
ПЦР на ВИЧ-инфекцию — единственная диагностика до появления антител к ВИЧ.
То есть до минимум трёх месяцев с начала инфицирования.
Прогресс заболевания ВИЧ-инфекцией характеризуется нарастанием количества вируса в крови.
Проведение ПЦР говорит о стадии заболевания ВИЧ и эффективности антиретровирусной терапии.
Помимо вышеперечисленных условий, есть обязательные исследования крови на ВИЧ-инфекцию для:
- новорожденных от ВИЧ-инфицированной матери
- наблюдения за концентрацией ВИЧ-инфекции
Все остальные условия являются необязательными.
Процедура сдачи ПЦР для диагностики наличия ВИЧ-инфекции в организме проста.
Берется венозная кровь и проводится анализ.
Нужно воздержаться от употребления любых продуктов около десяти часов.
Не употреблять алкоголь, ограничить физическую активность, исключить эмоциональные нагрузки.
Для этого нужна очень чистая лаборатория.
При получении положительного результата его обязательно перепроверяют.
Для этого используют референц-лабораторию.
Там проводят более точный исследовательский способ диагностики.
К сожалению, универсальность не 100%, и зачастую результат анализа ложноположительный.
Его используют вспомогательным методом для установления наличия или отсутствия ВИЧ-инфекции в организме.
Если проводят скрининг на наличие ВИЧ-инфекции или ставят диагноз ВИЧ инфицирования, то используют метод ПЦР.
Методом проводят и количественную оценку нахождения ВИЧ в организме.
Так определяется степень и тяжесть патологических изменений в организме.
Уровень концентрации ВИЧ-инфекции, в организме диагностируемого определяют методом ПЦР.
До лечения исследуется кровь методом ПЦР и после, и можно оценить правильность проводимого курса лечения.
Те ли препараты назначают или нужно другие.
Проводят анализ, и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не говорит о достоверности наличия ВИЧ-инфекции в организме.
Результаты анализов
Есть много поводов для исследования на наличие ВИЧ-инфекции в организме.
Предстоящая операция, планирование беременности, наличие в анамнезе случайных половых связей и другие похожие причины.
Есть категории работников (например, медицинские работники, учителя и другие) для которых эта процедура необходима, для допуска работы с людьми.
Есть определенная тревожная симптоматика, при которой анализ на ВИЧ-инфекцию проводят:
- при резкой потере веса
- при длительной диарее (около 3-х недель)
- при лихорадке невыясненной этиологии
- при росте лимфоузлов в разных местах
- при лимфо- и лейкопении
- при наличии необъяснимой пневмонии, системном кандидозе, туберкулезе, манифестном токсоплазмозе и других серьезных заболеваниях
Интерпретацией результатов проведенных анализов занимается только лечащий врач.
Какой бы ни был результат — это не повод заниматься лечением самостоятельно.
К тому же результат ввиду несовершенства метода может быть как ложноотрицательным, так и ложноположительным.
Иногда схожие результаты анализов у разных людей свидетельствуют о различной клинике.
Чаще делают количественный ПЦР-анализ на ВИЧ-инфекцию.
Этот анализ дает сведения о количестве вируса и отображается единицей копия/мл.
Расшифровка результатов:
- РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл)
- мизерное количество РНК (чуть больше 20 копий/мл)
- 20 — 106 копий/мл
- более чем 106 копий/мл
Самый опасный третий и четвертый результат.
Что делать, если результат анализа ПЦР на ВИЧ положительный
Анализы на ВИЧ-инфекцию делают в несколько этапов.
Это занимает период от двух до десяти дней.
Результаты анализов делятся на положительные, отрицательные и сомнительные.
Если результат сомнительный, то немного позже обязательно делают анализ еще раз.
Но даже положительный результат не окончательный.
Пересдача крови на анализ тоже делается.
На достоверность результата влияние оказывает некоторые заболевания и состояния организма.
Проведение анализа может быть конфиденциальным или анонимным.
При конфиденциальном обследовании имя обследуемого человека называется.
При анонимном обследовании анализ делают по идентификационному номеру.
Результат анализа может узнать только подвергшийся обследованию человек.
Даже положительный результат остается тайной.
Это врачебная тайна, и она не может быть нарушена.
Но даже подтвержденный положительный результат еще не приговор.
В современных условиях ВИЧ-инфицированные подвергаются пожизненной антиретровирусной терапии, что позволяет сохранить им жизнь.
Наоборот, чем раньше обнаружено наличие ВИЧ-инфекции в организме, тем плодотворнее будет лечение.
Перспективы метода в диагностике ВИЧ-инфекции
ПЦР относится к молекулярно-биологическим методам исследования.
Помимо диагностики ВИЧ-инфекции и ИППП, метод зарекомендовал себя в генетических разработках, в ветеринарной науке, сельском хозяйстве.
Продукты питания исследуют на содержание ГМО с помощью ПЦР.
Также сфера применения метода судебно-медицинская экспертиза.
Но все же нас интересуют, в первую очередь, перспективы ПЦР для постановки диагноза наличия ВИЧ-инфекции.
С помощью ПЦР выявляются даже единицы ВИЧ присутствия в крови.
Анализ характеризуется очень высокой чувствительностью — от одного до ста единиц ВИЧ.
Выраженная уникальность происходит за счет того, что идет поиск специфичной ДНК (или РНК) присущий конкретному возбудителю заболевания.
Реакция протекания операции копирования фрагментов РНК характеризуется высокой специфичностью метода ПЦР.
Поэтому амплификационная тест-система (ПЦР) выигрывает перед другими тест-системами иммунологического характера (например, ИФА).
Потому что нет «войны» между антигенами.
Еще важна и скорость ПЦР анализа.
Один рабочий день уходит на проведение ПЦР.
Но есть у метода и негативные качества.
Если ВИЧ-инфекция попадет в исследуемую кровь случайно, из воздуха, при ее отсутствии в организме, реакция копирования вируса все равно будет идти.
Поэтому и нужна такая стерильность в лаборатории, в которой проводиться ПЦР.
Благодаря большому непостоянству генетического материала ВИЧ уменьшаются диагностические показатели чувствительности.
Хотя сам метод очень чувствительный.
Чувствительность метода ПЦР характеризуют 98%. У ИФА этот показатель выше — 99%.
А за данными статистики или вовремя не продиагностируемые заболевшие или, наоборот, неправильно продиагностируемые о наличии в организме ВИЧ-инфекции.
Для лабораторий, в которых ПЦР проводиться, разрабатываются специальные системы внутреннего контроля, с целью повышения качества диагностики.
На основе стандартизированных межлабораторных панелей качества минимализируют ошибки тестирования.
Если все сделано правильно, без ошибок, то с помощью ПЦР можно определить только один фрагмент провируса на десять тысяч — сто тысяч лимфоцитов.
Методом определяют и резистентность к препаратам антиретрорвирусной терапии.
Конечно, метод несовершенный, но у него большие перспективы.
Особенно на ранних стадиях инфицирования, когда в крови еще нет антигенов.
Метод хоть и недешевый, но правильно проведенный, с соблюдением всех условий правильной постановки, очень информативный.
За ним — большое будущее.
В умелых руках ПЦР мощный диагностический инструмент.
Главное — уметь им пользоваться и избегать всевозможных ошибок.
Источник
ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции
Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ, коронавирус COVID-19 и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.
- тест методом ПЦР на коронавирус Covid-19, мазок из носа и зева на определение РНК вируса SARS-CoV-2;
Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно.
Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.
Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике — для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ — вирусов папилломы человека; в пульмонологии — для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии — для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний — в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии — для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.
Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами — короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 — 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.
После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.
Проведение ПЦР
Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:
- ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
- два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
- термостабильная ДНК-полимераза;
- дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
- ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
- буферный раствор.
ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.
Ход реакции
Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 — 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 — 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 — 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 — 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.
Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 — 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 — 2 минут.
ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 — 15 мин.
Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию
Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой — позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.
Словарь
ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота — биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.
РНК- рибонуклеиновая кислота — биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев — нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.
Нуклеоти́ды — основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию — адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) — гуанин, цитозиновый (C) — цитозин, тиминовый (Т) — тимин, урациловый (U) — урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов — A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа — A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК — рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.
Праймер — котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка.
Литература
- Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с., илл. ISBN 5-03-003328-9
- Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия — Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. — 496 с.; илл. ISBN 5-94087-098-8
- Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы — М.: Наука, 2005 — В 2 т. — ISBN 5-02-033278-X
- https://ru.wikipedia.org/wiki
ВАЖНО!
Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.
Источник