Мутантные штаммы гепатит в

Комплексное исследование при подтвержденном вирусном гепатите В (HBV). Анализ маркеров инфекции позволяет установить клиническую стадию заболевания, иммунологический статус обследуемого, а также оценить эффективность лечения. Включает в себя определение белков вируса (антигенов), основных классов специфических антител, а также обнаружение ДНК вируса в крови.

Венозную кровь.

• Исключить из рациона жирную пищу в течение 24 часов до исследования.
• Не курить за 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Вирусный гепатит B (HBV) – инфекционное заболевание, которое является причиной серьёзных поражений печени. Зачастую гепатит B переходит в хроническую форму, его течение становится затяжным и провоцирует возникновение цирроза и рака печени.

Вирус гепатита B (Hepadnaviridae) содержит двухцепочечную ДНК, окруженную нуклеокапсидом размером 27 нм, в состав которого входит антиген HBcAg, и внешней оболочкой, содержащей антиген HBsAg. Этот антиген обнаруживается в крови за 6 недель до появления симптомов заболевания и может выявляться длительное время как при их наличии, так и в при их отсутствии (при хроническом гепатите и носительстве). На ранних стадиях заболевания присутствует у 90-95 % больных.

Особенностью вируса гепатита B является то, что он поступает непосредственно в кровь и циркулирует в ней на протяжении всего периода заболевания. У некоторых пациентов вирус в крови сохраняется всю жизнь. По этой причине источником заражения могут стать не только те, кто болен гепатитом в его острой форме, но также те, кто уже перенес данное заболевание, а также люди, у которых заболевание не проявляется, однако они являются носителями вируса.

Полное выздоровление регистрируется у 92-95 % больных острым гепатитом В, и лишь у 5-8 % из них отмечается переход заболевания в хроническую форму.

Гепатит B лечится исключительно в условиях стационара. Это заболевание в случае длительного течения является фактором риска развития первичной гепатоцеллюлярной карциномы (рак печени).

В жизнедеятельности вируса гепатита В различают две фазы: фазу репликации и фазу интеграции. В фазе репликации происходит воспроизведение (размножение) вируса. ДНК вируса проникает в ядро гепатоцита, где с помощью ДНК-полимеразы синтезируется нуклеокапсид, содержащий ДНК вируса, антигены HBcAg, HBeAg, которые являются основной мишенью иммунной системы. Затем нуклеокапсид мигрирует из ядра в цитоплазму, где реплицируются белки внешней оболочки (HBsAg), и, таким образом, происходит сборка полного вириона. При этом избыток HBsAg, не использованный для сборки вируса, через межклеточное пространство попадает в кровь. Полная сборка (репликация) вируса заканчивается презентацией его растворимого нуклеокапсидного антигена – HBeAg на мембране гепатоцита, где происходит его «узнавание» иммуноцитами. Антиген HBcAg серологическими методами не определяется, потому что отсутствует в крови в свободном виде. Определяется наличие в крови антител (anti-HBc) к этому антигену, вырабатывающихся вследствие его высокой иммуногенности.

Маркерами фазы репликации вируса гепатита В являются:

• выявление в крови антигенов HBeAg и anti-HBc (Ig M).

У 7-12 % больных хроническим вирусным гепатитом В возможен спонтанный переход фазы репликации в нерепликативную фазу (при этом из крови исчезает HBeAg и появляются anti-HBe). Именно фаза репликации обусловливает тяжесть поражения печени и контагиозность больного.

В фазе интеграции происходит интегрирование (встраивание) фрагмента вируса гепатита В, несущего ген HBsAg, в геном (ДНК) гепатоцита с последующим образованием преимущественно HBsAg. При этом репликация вируса прекращается, однако генетический аппарат гепатоцита продолжает синтезировать HBsAg в большом количестве.

Вирусная ДНК может быть интегрирована не только в гепатоциты, но и в клетки поджелудочной железы, слюнных желез, лейкоциты, сперматозоиды, клетки почек.

Фаза интеграции сопровождается становлением клинико-морфологической ремиссии. В этой фазе в большинстве случаев формируется состояние иммунологической толерантности к вирусу, что приводит к купированию активности процесса и носительству HBsAg. Интеграция делает вирус недосягаемым для иммунного контроля.

Серологические маркеры фазы интеграции:

• наличие в крови только HBsAg или в сочетании с anti-HBc (IgG);
• отсутствие в крови ДНК-вируса;
• сероконверсия HBeAg в anti-HBe (т.е. исчезновение из крови HBeAg и появление anti-HBe).

Пациенты, перенесшие инфекцию и имеющие антитела к вирусу, не могут повторно заразиться гепатитом B. В некоторых случаях полное выздоровление не наступает и человек становится хроническим вирусоносителем. Вирусоносительство может протекать бессимптомно, но в некоторых случаях развивается хронический активный гепатит B. Ключевым фактором риска активного вирусоносительства является возраст, когда человек был заражен: для грудных детей уровень риска превышает 50 %, в то время как для взрослых остается на уровне 5-10 %. Исследования показывают, что мужчины чаще становятся носителями, чем женщины.

HBsAg – поверхностный антиген вируса гепатита В

Поверхностный антиген вируса гепатита В (HВsAg) является белком, который присутствует на поверхности вируса. Обнаруживается в крови при остром и хроническом гепатите В. Самый ранний маркер. Достигает максимума к 4-6-й неделе заболевания. Сохраняется до 6 месяцев при остром гепатите, свыше 6 месяцев – при переходе заболевания в хроническую форму.

HBeAg – ядерный ‘е’-антиген вируса гепатита В

Антиген, находящийся в ядре вируса. Появляется в крови одновременно с HBsAg и сохраняется в течение 3-6 недель. HBeAg появляется в крови больного острым гепатитом В одновременно с HBsAg или вслед за ним и сохраняется в крови 3-6 недель. Указывает на активное размножение и высокий риск передачи вируса при половом контакте, а также перинатально. Инфекционность HBeAg-положительной сыворотки в 3-5 раз выше, чем HBsAg-положительной. Выявление HBeAg в крови более 8-10 недель свидетельствует о переходе заболевания в хроническую форму. При отсутствии репликативной активности вируса во время хронической инфекции HBeAg не выявляется. Его появление же свидетельствует о реактивации вируса, что чаще происходит на фоне иммуносупрессии.

При лечении вирусного гепатита В исчезновение HBeAg и появление антител к HBe-антигену свидетельствует об эффективности терапии.

anti-HBc (Ig M) – специфические антитела класса IgМ к ядерному ‘core‘ антигену вируса

Начинают вырабатываться еще до клинических проявлений, указывают на активную репликацию вируса.

Появляются в крови через 3-5 недель, сохраняются в течение 2-5 месяцев и исчезают в период выздоровления.

anti-HBc – суммарные антитела (IgM+IgG) к ядерному ‘core’ антигену вируса гепатита В

Важный диагностический маркер, особенно при отрицательном значении HBsAg. Антитела класса IgM вырабатываются через 3-5 недель. Антитела класса IgG начинают вырабатываться с 4-6-го месяца и могут сохраняться пожизненно. Подтверждают контакт организма с вирусом.

anti-HBs – суммарные антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В

Появляются медленно, достигая максимума через 6-12 месяцев. Указывают на перенесенную инфекцию или наличие поствакцинальных антител. Выявление этих антител свидетельствует о выздоровлении и развитии иммунитета. Обнаружение антител в высоком титре в первые недели заболевания может быть связано с развитием гипериммунного варианта фульминантного гепатита В.

anti-HBe – антитела к ‘е’-антигену вируса гепатита В

Появляются на 8-16-й неделе после инфицирования у 90 % больных. Свидетельствуют о завершении острого периода болезни и начале периода реконвалесценции. Могут сохраняться до 5 лет после перенесенного заболевания.

HBV (ДНК) – ДНК вируса гепатита В

Маркер наличия и репликации вируса. Методом ПЦР можно определить ДНК вируса качественно или количественно. Благодаря качественному методу подтверждается присутствие вируса гепатита В в организме и его активное размножение. Это особенно важно в сложных диагностических случаях. При инфицировании мутантными штаммами вируса результаты теста на специфические антигены HBsAg и HBeAg могут быть отрицательными, но при этом риск распространения вируса и развития заболевания у зараженного человека сохраняется.

Качественное определение ДНК вируса играет важную роль в раннем выявлении гепатита В у людей с высоким риском инфицирования. Генетический материал вируса обнаруживается в крови на несколько недель раньше, чем HBsAg. Положительный результат ПЦР за период более 6 месяцев указывает на хроническую инфекцию. Определение вирусной нагрузки (количество ДНК вируса в крови) позволяет оценить вероятность перехода заболевания в хроническую форму.

Повышенные уровни печеночных трансаминаз при положительном результате ПЦР являются показателями необходимости проведения терапии. Во время лечения вирусного гепатита В исчезновение ДНК вируса свидетельствует об эффективности лечения.

Для чего используется исследование?

• Для оценки серологического профиля;
• для выяснения стадии заболевания и степени контагиозности;
• для подтверждения заболевания и уточнения его формы (острая, хроническая, носительство);
• для наблюдения за течением хронического гепатита В;
• для оценки эффективности противовирусной терапии.

Когда назначается исследование?

• При выявлении у пациента поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg);
• при подозрении на инфицирование вирусом гепатита В и сомнительных результатах серологических тестов;
• при микст-гепатитах (сочетанные вирусные гепатиты В и С);
• при динамическом наблюдении за больным гепатитом В (определение стадии процесса при совместном исследовании на другие специфические маркеры инфекции).

Что означают результаты?

Референсные значения

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

• [07-004] anti-HBc, IgM
• [07-005] anti-HBc, антитела
• [07-007] anti-HBs, антитела
• [07-024] HBeAg
• [07-025] HBsAg
• [07-111] anti-HBe, антитела
• [09-008] HBV, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Острый гепатит В. Выделяют «дикий» штамм (естественный) и «мутантный» штамм (вид) вируса. Определение штамма вируса имеет определенное значение при выборе противовирусного лечения. Мутантные штаммы вируса несколько хуже поддаются лечению в сравнении с «диким».

Хронический гепатит В (ХВГВ). Выделяют три серологических варианта:

1. ХВГВ с минимальной активностью (ранее использовали термин «носительство HBsAg»);
2. НВе-негативный ХВГВ;
3. НВе-позитивный ХВГВ.

Интерпретация сочетаний серологических маркеров гепатита В



Кто назначает исследование?

Инфекционист, гастроэнтеролог, гепатолог, эпидемиолог.

[09-009] HBV, ДНК количественно [реал-тайм ПЦР]

[06-003] Аланинаминотрансфераза (АЛТ)

[06-010] Аспартатаминотрансфераза (АСТ)

[06-013] Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)

[40-120] Билирубин и его фракции (общий, прямой и непрямой)

[06-045] Фосфатаза щелочная общая

[06-004] Альбумин в сыворотке

[03-011] Фибриноген

[40-483] Лабораторное обследование функции печени

Литература

• А. М. Сокурова, ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет» Минздрава России, Специфическая лабораторная диагностика вирусных гепатитов, УДК: 616.36-002:578.891.
• Harrison’s Principles of Internal Medicine. 16th ed. NY: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.

)

ÌÓÒÀÍÒÛ ÂÈ1ÐÓÑÀ ÃÅÏÀÒÈÒÀ  (Genetic variants of hepatitis  virus) — âàðèàíòû âèðóñà ãåïàòèòà Â. îòëè÷àþùèåñÿ îò ïðîòîòèïíûõ øòàììîâ âèðóñà ãåïàòèòà  ïî íóêëåîòèäíûì ïîñëåäîâàòåëüíîñòÿì ÄÍÊ. Âîçìîæíîñòü, âûÿâëåíèÿ ìóòàíòîâ âèðóñà ãåïàòèòà  ïîÿâèëàñü ïîñëå ðàçðàáîòêè ìåòîäîâ ãåííîé èíæåíåðèè , ïîçâîëÿþùèõ îïðåäåëèòü ïîñëåäîâàòåëüíîñòè íóêëåîòèäîâ ãåíîìà ðàçëè÷íûõ èçîëÿòîâ âèðóñà.

Ïî ñðàâíåíèþ ñ äðóãèìè ÄÍÊ-ñîäñðæàùèìè âèðóñàìè, âèðóñ ãåïàòèòà  îáëàäàåò áîëåå âûñîêîé ãåíåòè÷åñêîé âàðèàáåëüíîñòüþ èç-çà íàëè÷èÿ â åãî öèêëå ðåïëèêàöèè ýòàïà îáðàòíîé òðàíñêðèïöèè ñ îáðàçîâàíèåì ïðåãåíîìà. Èäåíòèôèöèðîâàíû âèðóñû ãåïàòèòà Â, èìåþùèå ìóòàöèè âî âñåõ ãåíàõ âèðóñà. Áîëüøèíñòâî èç íèõ íå âûçûâàþò èçìåíåíèé ñâîéñòâ âèðóñà, åãî àíòèãåíîâ èëè òå÷åíèÿ èíôåêöèîííîãî ïðîöåññà. Âìåñòå ñ òåì, âûÿâëåíû íåñêîëüêî ìóòàíòíûõ øòàììîâ, êîòîðûå àññîöèèðóþòñÿ ñ òàêèìè èçìåíåíèÿìè.

Ìóòàöèè, ïðîèñõîäÿùèå â ÄÍÊ BÃB, ìîãóò ïðèâåñòè ê:

• ìîäèôèêàöèè, ýëèìèíàöèè èëè ñ” íàöèþ íîâûõ ýïèòîïîâ, âëèÿþùèõ íà èììóííûé îòâåò îðãàíèçìà íà âèðóñ ãåïàòèòà Â;
• èçìåíåíèþ íåïîñðåäñòâåííîþ äåéñòâèÿ áåëêîâ âèðóñà íà èíôèöèðîâàííûå ãåïàòîöèòû; — èçìåíåíèþ ðåïëèêàöèè ÄÍÊ ÂÃÂ, ñáîðêè âèðóñíûõ ÷àñòèö è ñåêðåöèè âèðóñíûõ áåëêîâ.

Çàìåíà ãóàíèíà íà àäåíèí â 1896 ïîëîæåíèè â ðãå-Ñ çîíå Âàâûçûâàåò îáðàçîâàíèå ó÷àñòêà ÄÍÊ, ïðåïÿòñòâóþùåãî ñ÷èòûâàíèþ èíôîðìàöèè è ñèíòåçó HBeAg.  ñëó÷àÿõ ïîÿâëåíèÿ òàêîé ìóòàöèè è àêòèâíîé ðåïëèêàöèè ÄÍÊ Âàìóòàíòíîãî øòàììà ó íîñèòåëÿ HBsAg ïðîèñõîäèò èììóíîýëèìèíàöèÿ âèðóñà, êîòîðàÿ äî ýòîãî ìîìåíòà ñäåðæèâàëàñü òîëåðàíòíîñòüþ ê HBeAg, âûçâàííîé âûñîêîé êîíöåíòðàöèåé HBeAg. Îòðàæåíèåì ýòîãî ïðîöåññà ñëóæèò ïîâûøåíèå óðîâíåé ñûâîðîòî÷íûõ òðàíñàìèíàç è óõóäøåíèå ñàìî÷óâñòâèÿ áîëüíîãî.  ñûâîðîòêå êðîâè, íàðÿäó ñ HBsAg è àíòè-ÍÂå, óäàåòñÿ âûÿâèòü ÄÍÊ ÂÃÂ.

Ìóòàíòíûå øòàììû Âàâ ðãå-Ñ çîíå âûÿâëåíû ó HBsAg ïîçèòèâíûõ áîëüíûõ ÕÀà è íîñèòåëåé HBsAg â ðàçëè÷íûõ ñòðàíàõ (Èòàëèÿ, Ãðåöèÿ, Ãåðìàíèÿ è äð. ), à òàêæå ó áîëüíûõ ôóëüìèíàíòíûì ãåïàòèòîì . Ñ÷èòàþò, ÷òî áîëüíûå, èíôèöèðîâàííûå ýòèì øòàììîì âèðóñà ãåïàòèòà Â, ïëîõî ïîääàþòñÿ ëå÷åíèþ ïðåïàðàòàìè èíòåðôåðîíà ñ áîëåå ÷àñòûìè ðåöèäèâàìè ïîñëå çàâåðøåíèÿ òåðàïèè.

Äðóãîé øòàìì Âàâûÿâëåí ó äåòåé, ðîäèâøèõñÿ îò ìàòåðåé-íîñèòåëåé HBsAg è ïðîâàêöèíèðîâàííûõ ïðè ðîæäåíèè ïðîòèâ ãåïàòèòà Â. Äàííûé øòàìì íåñåò òî÷å÷íóþ ìóòàöèþ 145 àìèíîêèñëîòû S-ãåíà ñ çàìåíîé ãëèöèíà íà àðãèíèí. Ïðåäïîëàãàþò, ÷òî îáíàðóæåííûé ìóòàíò èìååò ïîâåðõíîñòíûé àíòèãåí âèðóñà ãåïàòèòà  ñ íåîáû÷íûì ýïèòîïîì, êîòîðûé íå íåéòðàëèçóåòñÿ àíòèòåëàìè ê “à”- äåòåðìèíàòå HBsAg, âõîäÿùåãî â êîììåð÷åñêèå âàêöèíû ïðîòèâ ãåïàòèòà Â.

Ñ íàëè÷èåì ìíîæåñòâåííûõ ìóòàöèé â ðàçëè÷íûõ ãåíàõ Âàñâÿçûâàþò ñëó÷àè îáíàðóæåíèÿ ÄÍÊ Âàâ ïå÷åíè áîëüíûõ îñòðûì è õðîíè÷åñêèì ãåïàòèòîì  ïðè îòðèöàòåëüíûõ ðåçóëüòàòàõ òåñòèðîâàíèÿ ñåðîëîãè÷åñêèõ ìàðêåðîâ èíôèöèðîâàíèÿ ÂÃÂ.

Ñ÷èòàþò, ÷òî ìóòàíòíûå øòàììû Âàâûçûâàþò ãåïàòèò  2, ïðè êîòîðîì ðåãèñòðèðóåòñÿ íåîáû÷íûé ïðîôèëü ñåðîëîãè÷åñêèõ ìàðêåðîâ èíôèöèðîâàíèÿ (HBsAg ïðè îòñóòñòâèè àíòè-ÍÂñ, HBeAg è àíòè-ÍÂå). Âûñêàçûâàåòñÿ ïðåäïîëîæåíèå, ÷òî äàííûé øòàìì îáëàäàåò ñïîñîáíîñòüþ ê ðåâåðñèè, ò. å. îáðàòíîé ìóòàöèè ñ âîçâðàòîì ê “äèêîìó” òèïó.

Âîçâðàò íà ãëàâíóþ ñòðàíèöó.

Âîçâðàò â ÊÓÍÑÒÊÀÌÅÐÓ.