Тестирование на вич методом пцр
Содержание статьи
ПЦР на ВИЧ, для чего нужен этот анализ
ПЦР на ВИЧ — один из самых информативных методов молекулярно-генетического диагностирования. Этот способ помогает выявить у пациента разного рода инфекционные недуги и заболевания, которые передаются по наследству. Этот же метод диагностики применим в случае проверки биоматериала на присутствие ВИЧ — тяжелого заболевания, развивающегося на протяжении всей жизни пациента. С медицинской помощью ПЦР оказалась в числе рекомендуемых анализов, проводимых на платной основе при подозрении на вирус иммунодефицита человека. Однако достоверность исследования оправдывает себя только в 80 из 100 случаев.
Содержание
Полимеразная цепная реакция
ПЦР диагностика на ВИЧ расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Для исследования данного вида применяются различные типы биологических материалов. Среди них кровь, кроме этого может использоваться секреция из влагалища пациентки или семенная жидкость у мужчин.
Внимание! Слюна для ПЦР при диагностике ВИЧ не используется. Подобный подход признан неэффективным, поскольку в этом материале антитела к ВИЧ находятся в минимальной концентрации. Это же касается мочи, пота и слез.
Показанием к проведению описываемого исследования, является дважды положительный ИФА (иммуноферментный анализ). Об альтернативных назначениях речь пойдет позже.
Подробно о сути анализа
В основе анализа на ВИЧ методом ПЦР лежит возможность нуклеиновой кислоты самостоятельно репродуцироваться. Живые клетки состоят из белка и этих самых кислот, иначе говоря, из РНК и ДНК. Молекулы выступают в роли хранителей генетического кода.
При низкой концентрации вирусных частиц (ВИЧ) в биоматериале, проба включает не целые цепочки ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты), а только их составляющие, называемые нуклеотидами. Анализ позволяет выявить даже незначительные остатки клеток вируса. Именно этим фактом объясняется способность ПЦР демонстрировать результат на ранних сроках — спустя несколько недель после заражения ВИЧ.
Наиболее качественных результатов от проведения полимеразной цепной реакции стоит ждать при исследовании венозной крови. Пробу расщепляют с помощью оборудования. Затем фракции подвергаются ферментной обработке. Реактивные вещества, объединившись с частицами вирусной ДНК, дублируют ее. Число таких элементов возрастает по принципу цепочки, пока их наличие (не антител) в крови пациента не станет заметно лаборантам. По точно такому же принципу не работает ни один из существующих способов диагностики.
Компоненты реакции
С помощью метода ПЦР можно заблаговременно узнать о развитии вируса в организме. Почему же его нельзя назвать популярным в области бесплатной медицины и делать повсеместно? Дело в том, что такой тест на ВИЧ весьма затратный и требует наличия следующих компонентов:
- матрица дезоксирибонуклеиновой кислоты, включающая отрезок ДНК, предназначенный для амплификации;
- два праймера (для каждого цепного отрезка);
- химически активный компонент полимераза для ускорения полимеризации вирусных частиц;
- дезоксирибонуклеозидтрифосфаты;
- частицы двухвалентного магния (заряженные);
- специальный раствор для создания благоприятных условий, обеспечивающий должный уровень кислотности, солевой концентрации, количества частиц магния в жидкости.
Внимание! Чтобы защитить образец от перегрева, в материал добавляют небольшое количество вазелина, который содержит жиры и, соответственно, высокую температуру кипения.
Относительно высокий показатель точности анализа объясняется его повышенной чувствительностью, которая стимулирует реакцию на антитела к прочим вирусам.
Преимущества и недостатки методики ПЦР при ВИЧ
Для объективной оценки метода в таблице ниже приведем ряд преимуществ и недостатков исследования:
| Плюсы | Минусы |
| — достаточно высокий показатель точности (выявляет вирус в 80% случаев) — универсальность (для проведения исследования используют не только кровь, но и влагалищные выделения, сперму) — обширный спектр методики (одну пробу биологического материала можно проверить на несколько болезней) — скорость получения результата (пациент получает ответ на следующие сутки — более оперативны в этом плане экспресс-методы) — высокая чувствительность (возможна диагностика на ранних этапах развития ВИЧ, чего не скажешь об ИФА или общем анализе крови на инфекцию) — отсутствие возрастных ограничений (такой анализ крови на ВИЧ можно брать и у ребенка с момента его рождения) | — высокая цена — необходимость использования высокотехнологичного оборудования — 20 % получения ложноположительных результатов (по причине высокой чувствительности метода) |
Очевидно, преимуществ методики больше. Если оценивать тип диагностики с точки зрения продуктивности дальнейшего лечения и возможности продления жизни пациенту, ПЦР — самый верный путь к успеху.
Особенности анализа
Основная особенность описываемого анализа состоит в его способности к ранней диагностики ВИЧ, на что не способны другие методы исследований. Через сколько дней после предполагаемого инфицирования можно сдавать кровь на ПЦР? Обычно этот временной промежуток составляет 10-14 дней. В течение следующих 24 часов пациент получает результат. Возможные отклонения в сроках объясняются индивидуальными условиями работы диагностических центров, клиник.
Назначение исследования
ПЦР в большинстве своем проводится в целях выявления ВИЧ (синдрома иммунодефицита человека). Однако анализ можно сдать и при подозрении на развитие заболеваний, которые передаются половым путем. Этот же метод применим и в случае диагностики наследственных болезней.
ПДР-диагностика: причины для проведения
Когда следует сдавать кровь на ПЦР? Биологический материал в большинстве случаев сдается, когда вирус иммунодефицита человека приспособился к условиям организма, простимулировал выработку антител и вызвал первые симптомы ВИЧ. Однако подобное оправдано лишь в случае истечения достаточного количества времени после заражения и предполагает проведение ИФА.
Необходимость же в ПЦР возникает по инициативе пациента, который желает оперативно диагностировать заболевание (если таковое имеет место быть). Причиной тому может быть: незащищенный половой акт, контакт с биологическим материалом инфицированного, недавнее переливание крови и пр.
Кому назначается ПЦР?
Определение инфекции ВИЧ при помощи ПЦР по рекомендации специалиста производят в следующих случаях:
- предварительное диагностирование. ПЦР безошибочно подтверждает или опровергает результат ИФА;
- иммуноблоттинг подтвердил диагноз. Иммунный блоттинг является дополнительным способом исследования СПИДа. Оба метода применяются совместно, что позволяет исключить вероятность постановки ошибочного диагноза;
- при подтвержденном ВИЧ-статусе с помощью ПЦР отслеживают эффект от проведения выбранного лечения;
- для анализа крови доноров на присутствие ВИЧ-антител;
- для определения ВИЧ-статуса у новорожденного, когда мать имеет положительный результат. ПЦР в первые дни жизни позволяет определить внутриутробное инфицирование или заражение младенца при прохождении по родовым путям. Тест проводится на 2 — 3 неделе после рождения.
Сколько времени делается анализ ПЦР, и где его можно сдать?
Анализ ПЦР на ВИЧ проводится в специальной лаборатории. Сам тест и трактовка результата не требует много времени: месяца и даже недели. Для взятия крови необходимо до 6 минут. В обычном случае специалисту, чтобы поставить диагноз и выдать заключение, потребуется не больше суток. Первые 8 часов происходит изучение крови, оставшееся время уходит на оформление. Результат можно будет забрать уже на следующий день после взятия пробы. Срок проведения экспресс-тестирования — 2 часа.
Внимание! Полис ОМС дает возможность прохождения теста бесплатно в государственном учреждении здравоохранения.
Почти любая коммерческая лаборатория способна провести исследование, причем, на анонимной основе. Человеку присваивают специальный номер, к которому затем привязывают результаты. Данная информация заливается на сайт учреждения в личный кабинет пользователя.
Сколько стоит сдать ПЦР-исследование?
Данный способ проведения исследований является достаточно дорогим. Связано это с тем, что проводить ПЦР необходимо на новейшем медицинском аппарате, манипуляция требует от специалистов достаточного багажа знаний.
Насущный вопрос: сколько же стоит человеку сдать анализ ПЦР на ВИЧ? Для этого потребуется в районе 56-60 долларов.
Проведение анализа
Проведение анализа ПЦР на ВИЧ предусматривает:
- забор крови на проведение исследование;
- дополнительный забор спермы у мужчины и половых выделений у женщины.
Внимание! В результате тест позволяет медикам определить высокую вирусную нагрузку для того, чтобы осуществлять контроль над состоянием больного.
Прочие особенности проведения этого анализа на ВИЧ, которые стоит принять во внимание:
- пару дней до теста пациенту следует снизить количество жирной пищи в рационе;
- забор крови производится на голодный желудок;
- к расщепленным биологическим материалам в особом реакторе добавляются ферменты, синтезирующие различные инфекции;
- анализ проводят в несколько этапов, т. к. деление молекул происходит в арифметической прогрессии. Специальная программа осуществляет сравнение большого количества клеточных структур для выявления ВИЧ.
Методы точной диагностики, к которым относится ПЦР, отличаются высокой стоимостью, но способны на ранних сроках выявить ВИЧ. В лечении подобных патологий самое главное — правильно и своевременно поставленный диагноз, который может улучшить качество жизни человека и ее продолжительность.
Источник
ПЦР на ВИЧ
Возможность записаться к врачу как мужского так и женского пола на выбор
Уникальная авторская 100% БЕЗБОЛЕЗНЕННАЯ методика забора мазков у мужчин
300 метров от метро Кропоткинская
БЕЗ ВЫХОДНЫХ с 09:00 до 20:00
Результаты анализов за 20 минут (мазок и кровь на ЗППП) стоимость 500 рублей на 1 инфекцию
Врачи высшей категории, кмн с опытом работы от 15 лет — консультация 900 рублей
Анонимность анализов и лечения
Записаться на прием
Полимеразная цепная реакция, или ПЦР.
Метод определения в пробах материалов, подвергающихся исследованию, любых ДНК и РНК, в случае неэффективности других методов.
Суть этого метода звучит в самом названии.
Поначалу исторический экскурс.
Автор разработки Кэри Мюллис, заработал Нобелевскую премию за работу 1983 года.
Первоначально планировалось научное применение метода, но впоследствии он завоевал свое место и в диагностической медицине.
Этим методом можно определять генетический материал всевозможных инфекций.
Гинекологические и урологические труднодиагностируемые инфекции выявляются этим методом.
Очень часто ПЦР используется для диагностики ВИЧ.
Основы метода, на основании которых работает исследование, основаны на уникальности фрагмента ДНК для каждой инфекции.
В случае с ВИЧ это РНК.
Руководствуясь принципом комплементарности, эталонный участок ДНК или РНК делает обнаружение «своего» фрагмента.
И создает большое количество копий этого фрагмента ДНК (или РНК).
Геометрическая прогрессия определяет число копий в течение цикла ПЦР (около 3-х минут).
По прошествии нескольких часов число фрагментов — несколько миллиардов.
Теперь несложно определить и возбудителя инфекции.
Метод силен своей универсальностью.
Для определения фрагментов ДНК (или РНК) возбудителя любой инфекции всегда используется одно и то же стандартное оборудование.
ПЦР славится и своей специфичностью (практически 100%).
Можно использовать один и тот же исследуемый материал для поиска разных возбудителей заболеваний.
У метода очень высокая чувствительность и оперативность.
Всего в течение дня, можно узнать, есть ли возбудитель в организме и какой.
Инкубационный период не мешает проведению исследования.
Нет еще клиники заболевания и антител в крови, но есть ДНК или РНК конкретного возбудителя в организме подвергающегося исследованию.
К недостаткам метода нужно отнести высокую квалификацию врача, берущего материал для исследования, и лаборанта, проводящего исследование.
Также важна высокая чистота помещения, в котором проводят исследование (практически 100%), чтобы результаты исследований были достоверными.
Для ИППП существуют специальные комплексные исследования, при которых определяют наличие сразу нескольких возбудителей.
А теперь поговорим о перспективах ПЦР для диагностики ВИЧ-инфекции.
Когда делают ПЦР на ВИЧ
От четырех до четырнадцати дней спустя, после инфицирования, можно обнаружить ВИЧ данным методом.
Достоверность результата оценивают, когда минуло четырнадцать дней спустя опасной половой связи.
Наличие отрицательного результата говорит о достоверности проведенного исследования.
Но для того чтобы получить непререкаемый результат исследования проводят еще и ИФА.
ПЦР является высокочувствительным методом, в основе которого лежит амплификация (усиление) небольшого участка провирусной ДНК (или РНК) за счёт праймеров.
Праймеры — это специальные реагенты.
Желательная (не обязательная) процедура взятия венозной крови на исследование на ВИЧ-инфекцию.
Проведение ПЦР для диагностики достаточно дорогостоящий анализ.
Его делают не всегда, а в особых случаях.
Например, донорам.
И если случилась медицинская авария, в которой есть ВИЧ-инфицированные и возможно заразившиеся.
Спустя четырнадцать дней достоверность на наличие ВИЧ-инфекции порядка 98%.
По истечении пяти дней после предполагаемого заражения — 80%.
Анализ ИФА можно делать только тогда, когда появятся антитела к ВИЧ в крови.
Проходит от одного до трёх месяцев, иногда до года.
Поэтому если есть озабоченность по поводу ВИЧ инфицирования, лучше не тянуть, а сделать этот дорогостоящий, но такой необходимый анализ.
Важно знать диагноз как можно раньше.
Поставьте оценку статье:
Как делают
Нахождение ВИЧ в пробах крови методом ПЦР выполняется двумя вариантами:
- исследуется провирус ВИЧ-инфекции, точнее его ДНК
- исследуется плазма или сыворотка крови на РНК ВИЧ-инфекции
Периферическая кровь, точнее ее мононуклеарные клетки, исследуются на содержание провируса.
По причине того, что ИФА дает вероятность выше 98% — 99,9%, ПЦР не является 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции.
Большой процент ложноположительных срабатываний зависит и от чистоты лаборатории, где проводят исследования, и от квалификации проводящего исследования.
ПЦР на ВИЧ-инфекцию — единственная диагностика до появления антител к ВИЧ.
То есть до минимум трёх месяцев с начала инфицирования.
Прогресс заболевания ВИЧ-инфекцией характеризуется нарастанием количества вируса в крови.
Проведение ПЦР говорит о стадии заболевания ВИЧ и эффективности антиретровирусной терапии.
Помимо вышеперечисленных условий, есть обязательные исследования крови на ВИЧ-инфекцию для:
- новорожденных от ВИЧ-инфицированной матери
- наблюдения за концентрацией ВИЧ-инфекции
Все остальные условия являются необязательными.
Процедура сдачи ПЦР для диагностики наличия ВИЧ-инфекции в организме проста.
Берется венозная кровь и проводится анализ.
Нужно воздержаться от употребления любых продуктов около десяти часов.
Не употреблять алкоголь, ограничить физическую активность, исключить эмоциональные нагрузки.
Для этого нужна очень чистая лаборатория.
При получении положительного результата его обязательно перепроверяют.
Для этого используют референц-лабораторию.
Там проводят более точный исследовательский способ диагностики.
К сожалению, универсальность не 100%, и зачастую результат анализа ложноположительный.
Его используют вспомогательным методом для установления наличия или отсутствия ВИЧ-инфекции в организме.
Если проводят скрининг на наличие ВИЧ-инфекции или ставят диагноз ВИЧ инфицирования, то используют метод ПЦР.
Методом проводят и количественную оценку нахождения ВИЧ в организме.
Так определяется степень и тяжесть патологических изменений в организме.
Уровень концентрации ВИЧ-инфекции, в организме диагностируемого определяют методом ПЦР.
До лечения исследуется кровь методом ПЦР и после, и можно оценить правильность проводимого курса лечения.
Те ли препараты назначают или нужно другие.
Проводят анализ, и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не говорит о достоверности наличия ВИЧ-инфекции в организме.
Результаты анализов
Есть много поводов для исследования на наличие ВИЧ-инфекции в организме.
Предстоящая операция, планирование беременности, наличие в анамнезе случайных половых связей и другие похожие причины.
Есть категории работников (например, медицинские работники, учителя и другие) для которых эта процедура необходима, для допуска работы с людьми.
Есть определенная тревожная симптоматика, при которой анализ на ВИЧ-инфекцию проводят:
- при резкой потере веса
- при длительной диарее (около 3-х недель)
- при лихорадке невыясненной этиологии
- при росте лимфоузлов в разных местах
- при лимфо- и лейкопении
- при наличии необъяснимой пневмонии, системном кандидозе, туберкулезе, манифестном токсоплазмозе и других серьезных заболеваниях
Интерпретацией результатов проведенных анализов занимается только лечащий врач.
Какой бы ни был результат — это не повод заниматься лечением самостоятельно.
К тому же результат ввиду несовершенства метода может быть как ложноотрицательным, так и ложноположительным.
Иногда схожие результаты анализов у разных людей свидетельствуют о различной клинике.
Чаще делают количественный ПЦР-анализ на ВИЧ-инфекцию.
Этот анализ дает сведения о количестве вируса и отображается единицей копия/мл.
Расшифровка результатов:
- РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл)
- мизерное количество РНК (чуть больше 20 копий/мл)
- 20 — 106 копий/мл
- более чем 106 копий/мл
Самый опасный третий и четвертый результат.
Что делать, если результат анализа ПЦР на ВИЧ положительный
Анализы на ВИЧ-инфекцию делают в несколько этапов.
Это занимает период от двух до десяти дней.
Результаты анализов делятся на положительные, отрицательные и сомнительные.
Если результат сомнительный, то немного позже обязательно делают анализ еще раз.
Но даже положительный результат не окончательный.
Пересдача крови на анализ тоже делается.
На достоверность результата влияние оказывает некоторые заболевания и состояния организма.
Проведение анализа может быть конфиденциальным или анонимным.
При конфиденциальном обследовании имя обследуемого человека называется.
При анонимном обследовании анализ делают по идентификационному номеру.
Результат анализа может узнать только подвергшийся обследованию человек.
Даже положительный результат остается тайной.
Это врачебная тайна, и она не может быть нарушена.
Но даже подтвержденный положительный результат еще не приговор.
В современных условиях ВИЧ-инфицированные подвергаются пожизненной антиретровирусной терапии, что позволяет сохранить им жизнь.
Наоборот, чем раньше обнаружено наличие ВИЧ-инфекции в организме, тем плодотворнее будет лечение.
Перспективы метода в диагностике ВИЧ-инфекции
ПЦР относится к молекулярно-биологическим методам исследования.
Помимо диагностики ВИЧ-инфекции и ИППП, метод зарекомендовал себя в генетических разработках, в ветеринарной науке, сельском хозяйстве.
Продукты питания исследуют на содержание ГМО с помощью ПЦР.
Также сфера применения метода судебно-медицинская экспертиза.
Но все же нас интересуют, в первую очередь, перспективы ПЦР для постановки диагноза наличия ВИЧ-инфекции.
С помощью ПЦР выявляются даже единицы ВИЧ присутствия в крови.
Анализ характеризуется очень высокой чувствительностью — от одного до ста единиц ВИЧ.
Выраженная уникальность происходит за счет того, что идет поиск специфичной ДНК (или РНК) присущий конкретному возбудителю заболевания.
Реакция протекания операции копирования фрагментов РНК характеризуется высокой специфичностью метода ПЦР.
Поэтому амплификационная тест-система (ПЦР) выигрывает перед другими тест-системами иммунологического характера (например, ИФА).
Потому что нет «войны» между антигенами.
Еще важна и скорость ПЦР анализа.
Один рабочий день уходит на проведение ПЦР.
Но есть у метода и негативные качества.
Если ВИЧ-инфекция попадет в исследуемую кровь случайно, из воздуха, при ее отсутствии в организме, реакция копирования вируса все равно будет идти.
Поэтому и нужна такая стерильность в лаборатории, в которой проводиться ПЦР.
Благодаря большому непостоянству генетического материала ВИЧ уменьшаются диагностические показатели чувствительности.
Хотя сам метод очень чувствительный.
Чувствительность метода ПЦР характеризуют 98%. У ИФА этот показатель выше — 99%.
А за данными статистики или вовремя не продиагностируемые заболевшие или, наоборот, неправильно продиагностируемые о наличии в организме ВИЧ-инфекции.
Для лабораторий, в которых ПЦР проводиться, разрабатываются специальные системы внутреннего контроля, с целью повышения качества диагностики.
На основе стандартизированных межлабораторных панелей качества минимализируют ошибки тестирования.
Если все сделано правильно, без ошибок, то с помощью ПЦР можно определить только один фрагмент провируса на десять тысяч — сто тысяч лимфоцитов.
Методом определяют и резистентность к препаратам антиретрорвирусной терапии.
Конечно, метод несовершенный, но у него большие перспективы.
Особенно на ранних стадиях инфицирования, когда в крови еще нет антигенов.
Метод хоть и недешевый, но правильно проведенный, с соблюдением всех условий правильной постановки, очень информативный.
За ним — большое будущее.
В умелых руках ПЦР мощный диагностический инструмент.
Главное — уметь им пользоваться и избегать всевозможных ошибок.
Источник